[发明专利]一种基于荧光定量PCR与核酸酶GR-5相结合的铅离子检测方法有效
| 申请号： | 201310677048.1 | 申请日： | 2013-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN103695540A | 公开（公告）日： | 2014-04-02 |
| 发明（设计）人： | 朱颖越;邓大庆;王立梅;朱益波;齐斌 | 申请（专利权）人： | 常熟理工学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 徐蓓 |
| 地址： | 215500 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种基于荧光定量PCR与核酸酶GR-5相结合的铅离子检测方法，其包括：（1）将核酸酶GR-5与互补DNA固定化至PCR反应容器的内表面；（2）将待测样品加入到步骤（1）所得到的PCR反应容器中，其中，在铅离子存在时，在所述核酸酶GR-5的作用下，所述互补DNA在核糖核苷酸处发生断裂，以便产生短核酸链；（3）利用柠檬酸缓冲液对所述PCR反应容器进行清洗，以便除去未固定化的核酸分子；（4）向所述PCR反应容器中添加扩增引物，以便对固定的互补DNA进行实时荧光定量PCR；（5）基于所述实时荧光定量PCR的Ct值，确定所述样品中的铅离子浓度。该方法可以提出了一种全新的、简单快速的、高选择性、高灵敏性的生物传感器，用以检测样品中铅离子的浓度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 荧光 定量 pcr 核酸酶 gr 相结合 离子 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于荧光定量PCR与核酸酶GR‑5相结合的铅离子检测方法，其特征在于，包括：（1）将核酸酶GR‑5与互补DNA固定化至PCR反应容器的内表面，其中所述互补DNA含有核糖核苷酸；（2）将待测样品加入到步骤（1）所得到的PCR反应容器中，其中，在铅离子存在时，在所述核酸酶GR‑5的作用下，所述互补DNA在核糖核苷酸处发生断裂，以便产生短核酸链；（3）利用柠檬酸缓冲液对所述PCR反应容器进行清洗，以便除去未固定化的核酸分子；（4）向所述PCR反应容器中添加扩增引物，以便对固定的互补DNA进行实时荧光定量PCR；（5）基于所述实时荧光定量PCR的Ct 值，确定所述样品中的铅离子浓度。
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