[发明专利]一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法，属于兽医传染病学领域。它由鸭疫里默氏菌荚膜抗原与蜂胶制成，其含荚膜蛋白量为1.0~2.0mg/mL，含蜂胶干物质10~15mg/mL。它主要通过制备鸭疫里默氏菌荚膜抗原、制备蜂胶佐剂、配制菌苗来获得疫苗，其免疫产生期为10d，免疫持续期长达90d。制成的疫苗对鸭、鹅等具有较好安全性，可以诱导机体产生良好的免疫保护。

主权项

一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法，其特征在于：其制备方法包括： 1）　培养基的制备：制备改良LB培养基及改良TSA平板。2）菌种制备：取灭菌注射器吸2.5 mL的改良LB培养基，加入鸭疫里默氏菌菌种冻干瓶中，将溶解的菌种液划线接种于1个改良TSA平板上，置体积分数5%CO2培养箱中37℃培养24‑26 h；挑选圆形微突起、表面光滑奶油状半透明的特征单菌落2~3个，接种于20 mL改良LB培养基中，37℃振荡培养16 ‑18 h后取出，作为一级种子，2℃~8℃可保存5 d；取一级种子1 mL接种于100 mL改良LB培养基中，37℃振荡培养16 ‑18 h后取出，作为二级种子，2℃~8℃可保存5 d；3）荚膜提取：按1%体积比，将二级种子接种于改良LB培养基中，37℃振荡培养16 ‑18 h后取出，10000 g离心20 ‑30 min，弃上清，按菌泥湿重每1 g加入20 mL脱膜液，吹打混匀，于55‑57℃水浴锅中用电动搅拌器不间断搅拌1‑2 h，然后将脱膜液相继用冷水浴、冰水浴，分成小份于冰箱中冷却，直至液体发白但确保不能结冰，10000 g离心50‑60 min，取上清，装入透析袋内，紧塞透析管口，悬挂于盛有蒸馏水的透析箱横梁上，2℃~8℃静置，每12 h换水1次，换3‑4次水，最后换水12 h后收集透析袋内液体，即为鸭疫里默氏菌荚膜抗原；4）鸭疫里默氏菌荚膜提原的蛋白浓度测定：用紫外吸收法快速计算荚膜抗原中的蛋白浓度，测定3次，取平均值；5）荚膜提原蜂胶疫苗的制备：取纯度在80%以上的蜂胶，磨碎，溶解于无水乙醇中，根据要求配成100~150 mg/mL浓度的蜂胶乙醇溶液，将鸭疫里默氏菌荚膜抗原和蜂胶乙醇溶液混合配成混悬液，确保荚膜抗原的终浓度为1.0~2.0 mg/mL，蜂胶干物质含量为10~15 mg/mL，无菌分装于100 mL的疫苗瓶内，密封保存，2℃~8℃保存。