[发明专利]一种从油菜叶中提取高纯度SOD的方法

摘要

本发明涉及一种从油菜叶中提取高纯度SOD（超氧化物歧化酶）的方法。取新鲜的油菜叶1重量份，加入2-3重量份的磷酸钾缓冲液中，匀浆、离心获得叶绿体；再将叶绿体放入磷酸钾缓冲液中，结合超声波处理，离心获得粗酶液；加硫酸铵沉淀获得粗SOD，净离子交换柱分离、浓缩、冷冻干燥获得高纯度的SOD制品。该方法生产SOD具有纯度高、成本低、易推广应用等优点。

主权项

一种从油菜叶中提取高纯度SOD的方法，其特征在于，该方法通过以下工艺步骤：A、取新鲜的油菜叶1重量份，加入2‑3重量份50mmol/L的磷酸钾缓冲液中，搅打匀浆，用100‑120目筛抽滤，将滤液以3000‑5000转/分钟，离心16‑25分钟获得叶绿体；B、将A步骤所得叶绿体用0.2‑0.3重量份50mmol/L的磷酸钾缓冲液冲洗两次；放入5mmol/L的磷酸钾缓冲液中，一边搅拌一边用超声波进行粉碎处理，经离心机4000‑6000转/分钟，离心20‑30分钟，获得上清液即为粗酶液；C、向B步骤所得粗酶液中加入硫酸铵，直至硫酸铵的饱和度达到50‑60%，静置2‑4小时，经离心机4000‑6000转/分钟，离心30‑40分钟，取上清液；D、向C步骤所得上清液中加入硫酸铵至饱和浓度为93‑97%，静置2‑4小时，经离心机4000‑6000转/分钟，离心40‑50分钟，所得沉淀物即为粗制的SOD；E、将D步骤所得的粗制SOD，加入3‑5倍体积的5mmol/L的磷酸钾缓冲液溶解并透析，将透析过的溶液通过低温真空浓缩至原体积的1/3‑1/4；F、将E步骤所得浓缩液经Sephadex G‑75凝胶柱或DEAE‑ Sephadex A‑50离子交换柱进行提纯；凝胶柱的洗脱液为5mmol/L的磷酸钾缓冲液溶；离子交换柱的洗脱液为5‑300mmol/L的磷酸钾缓冲液溶，进行梯度洗脱；G、将F步骤所得洗脱液经低温真空浓缩，然后冷冻干燥后即可获得高纯度的油菜叶绿体SOD。