[发明专利]一种体外诱导扩增NKT细胞的方法

摘要

本发明涉及一种体外诱导扩增NKT细胞的方法，该方法由以下步骤组成：a.改造白血病细胞株K562，使其表达CD1d、anti-CD28MAb，筛选得到表达CD1d、anti-CD28MAb的稳定细胞株；b.用稳定表达CD1d、anti-CD28MAb的K562细胞培养NKT细胞。本发明稳定表达CD1d、anti-CD28MAb的K562细胞株，其表面表达CD1d分子，限制性的递呈α-GalCer给NKT细胞，能够充分刺激NKT细胞增殖，其表面表达的anti-CD28MAb是协同刺激信号CD28的单克隆抗体，提供了NKT细胞增殖的活化信号；能够提供同DC细胞一致的CD1d分子，且能够大量繁殖，从而避免了DC细胞不能增殖的缺陷，大大提高了NKT细胞增殖的高效率；稳定表达CD1d、anti-CD28MAb的K562细胞共培养的NKT细胞分泌IFN-γ的能力更强，从而作用于NK细胞、DC细胞和CD8⁺T细胞。

主权项

一种体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：a.改造白血病细胞株K562，使其表达CD1d、anti‑CD28 MAb，用淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞，采用RT‑PCR方法分别从人PBMC中扩增CD1d、anti‑CD28MAb cDNA,测序正确后，CD1d、anti‑CD28MAb基因分别克隆至含有不同筛选标记的2种真核表达载体，先后转染K562细胞，筛选稳定表达的细胞克隆，构建K562稳定细胞株K562‑CD1d‑anti‑CD28MAb；b.用100Gy γ射线辐照K562稳定细胞株，用含有IL‑2、IL‑15和α‑Galcer的培养基调整人外周血单个核细胞浓度至1×10⁶/ml，两种细胞混匀后置于37℃、5%的CO₂培养箱中培养；每3～4天进行补液及传代，第12天收获细胞。