[发明专利]一种查找与杆状病毒PCNA相互作用蛋白的方法无效
| 申请号： | 201310696294.1 | 申请日： | 2013-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN103713037A | 公开（公告）日： | 2014-04-09 |
| 发明（设计）人： | 陈慧卿;周亚竟;唐琦;李梅;黄国平;李国辉;麦维军;张春霞 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | G01N27/62 | 分类号： | G01N27/62;C12N15/34;C12N15/70;C07K14/01;C07K1/22;C07K1/18 |
| 代理公司： | 江苏纵联律师事务所 32253 | 代理人： | 戴勇 |
| 地址： | 212013 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种查找与杆状病毒PCNA相互作用蛋白的方法，应用分子克隆、DNA测序等手段克隆了苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）PCNA基因的全长DNA，并对其纯化，耦连到亲和层析柱，与质谱连用查找互作蛋白。本发明可应用于杆状病毒PCNA互作蛋白的查找与功能研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 查找 杆状病毒 pcna 相互作用 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种查找与杆状病毒PCNA相互作用蛋白的方法，其特征在于查找与AcMNPV即苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的PCNA即增殖细胞核抗原相互作用蛋白的方法，具体包含以下几个步骤：步骤一，克隆所述AcMNPV的PCNA基因连接到表达载体中；所述PCNA基因为GenBank ID：1403881；步骤二，在大肠杆菌Bl21中表达PCNA蛋白，通过Ni‑NTA Agarose柱子和FPLC Mono Q离子交换层析柱纯化，得到PCNA高纯蛋白；步骤三，利用所述PCNA高纯蛋白与CNBr‑Activated Sepharose 4B耦连，制备PCNA亲和层析柱；步骤四，在所述AcMNPV病毒感染SF9细胞后，收集感染后的总蛋白，经过PCNA亲和层析柱洗脱，SDS‑PAGE鉴定洗脱组分，质谱鉴定与PCNA相互作用的蛋白。
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