[发明专利]一种免酶切原核线性表达载体及基因快速表达方法在审
| 申请号： | 201310700730.8 | 申请日： | 2013-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN104726482A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 韩业君;贾晓静;米朔甫;乔玮博;彭小伟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院过程工程研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高效、快速、免酶切的线性表达载体，及其快速、完整表达蛋白的方法。本方法所提供的无需酶切的线性表达载体含有两个单链粘性末端，分别含有由12和14个核苷酸组成的单链，并含有T7启动子。克隆目的基因时，以带有特异核苷酸的基因片断为引物引物，通过D N A聚合酶进行P C R扩增，然后通过T4D N A聚合酶，产生具有单链的粘性末端。目的基因与线性表达载体带有互补的单链粘性末端，能够在常温迅速连接。本发明操作简单，无需限制性酶切，载体与基因连接效率高，重组蛋白带有HIS-标签，并能通过凝血酶酶切去除，保持蛋白的原始氨基酸序列。本发明能够作为平台技术，用于基因的快速表达、重组蛋白的大量生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 免酶切原核 线性 表达 载体 基因 快速 方法 | ||
【主权项】：
一种免酶切原核线性表达载体，其特征在于：原核表达载体是一种含有特定核苷酸片断的线性载体，序列见SEQUENCE，该核苷酸片断由启动子，编码凝血酶作用位点基因，2组编码6组氨酸基因，以及2个单链核苷酸粘性末端构成。
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