[发明专利]一种制备无血清培养的悬浮哺乳动物细胞系的方法、及其制备的细胞系和应用有效
| 申请号： | 201310706556.8 | 申请日： | 2013-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN104726392B | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张许科;孙进忠;白朝勇 | 申请（专利权）人： | 普莱柯生物工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;A61K39/145;A61P31/16 |
| 代理公司： | 北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韩登营 |
| 地址： | 471000 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种制备无血清培养的悬浮哺乳动物细胞系的方法，该方法包括：（1）复苏并培养哺乳动物细胞，得到贴壁培养的该哺乳动物细胞，用胰酶消化；（2）用添加了一定量血清的无血清培养基培养该贴壁培养的哺乳动物细胞，连续培养该哺乳动物细胞至适应该添加了一定量血清的无血清培养基；以及（3）重复步骤（2）中的该连续培育程序，逐渐降低该无血清培养基中的血清添加量，直到该无血清培养基中血清添加量为0，得到该悬浮培养的哺乳动物细胞。本发明的方法解决细胞获得均衡的营养，保证了疫苗的稳定性和均一性，同时取得了血清添加产生副作用的问题，使遭受外源污染的风险降低，且降低了动物的应激反应，也使得后续处理简单易行。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 血清 培养 悬浮 哺乳动物 细胞系 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种制备无血清培养的悬浮哺乳动物细胞系的方法，所述方法包括：(1)复苏并培养哺乳动物细胞，得到贴壁培养的所述哺乳动物细胞，用胰酶消化，所述哺乳动物细胞为MDCK细胞；(2)用添加了一定量血清的无血清培养基培养所述贴壁培养的哺乳动物细胞，连续培养所述哺乳动物细胞至适应所述添加了一定量血清的无血清培养基；以及(3)重复步骤(2)中的所述连续培育程序，逐渐降低所述无血清培养基中的血清添加量，直到所述无血清培养基中血清添加量为0，得到悬浮培养的哺乳动物细胞；其中，所述步骤(2)和(3)中的所述无血清培养基包括VP‑SFM AGTTM、MDCK细胞无血清无蛋白化学培养基、InVitrusTM、或SFM4MegaVirTM培养基以及在所述步骤(3)中当血清添加量为1％及以下时，所述无血清培养基还包括添加成分0.1％Pluronic F‑68和30μg/ml硫酸葡聚糖；所述步骤(2)中所述血清添加量为5％；所述步骤(3)中所述逐渐降低的血清添加量分别为3％、1％、0.5％、0％；所述步骤(2)和(3)中的连续培养所述哺乳动物细胞至适应所述添加了一定量血清的无血清培养基的程序为连续培养3～5代。
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