[发明专利]一种丝状真菌基因组DNA提取的破壁方法

摘要

一种丝状真菌基因组DNA提取的破壁方法，采用多步离心及玻璃棒挤压进行破壁，具体依次经真菌培养，收集菌体，多步添加提取液，冻结，破除丝状菌体，收集基因组DNA溶液，沉淀基因组DNA的方法。该方法采用-20℃的普通冰箱和自制的玻璃棒，实验设备易得，减少了传统方法中对液氮的依赖，研钵研磨时的杂菌污染，且该方法操作方便、经济实惠，能方便、快捷地获得丝状真菌基因组DNA，可以推广使用。

主权项

一种丝状真菌基因组DNA提取的破壁方法，包括以下步骤，1）培养：将丝状真菌接种于液体培养基中，25~30℃环境下，震动培养1~2天，静止培养2~7天；2）收集菌体：挑取丝状真菌菌丝置于离心管中离心，倒掉上清液，收集菌体，再将菌体与灭菌双蒸水混合菌丝后离心，弃上清，保留真菌菌丝；3）加提取液：在步骤2）离心后的含菌丝体离心管中加入DNA提取缓冲液，混合菌体和提取缓冲液；4）冻结：将步骤3）处理得到的菌体放入‑28~‑18 ℃冰箱中，放置1~2 h冻结；5）破碎丝状菌体：将步骤4）得到已经冻结的菌体，用灭菌的玻璃棒挤压破壁；6）收集基因组DNA溶液：重复步骤4）和步骤5）3~7次后，将破壁后得到的菌体破碎液的一半转移到另一支离心管中，置于65 ℃ 恒温30 min，加入等体积的混合液Ｉ，充分混匀，离心，吸取600~700ｕL上清液移入到同一支的离心管中，同时加入等体积的混合液ＩＩ，充分混匀，离心；7) 沉淀基因组DNA：将步骤6）得到的上清液移入到新的离心管中，并加入2.5倍体积 ‑20 ℃ 预冻的无水乙醇，离心，去上清液，用 75 %的酒精洗涤沉淀2次，挥干后得到丝状真菌基因组DNA。