[发明专利]一种快速检测血浆中猪附红细胞体的胶体金试纸条

摘要

本发明提供了一种血浆中猪附红细胞体的快速检测胶体金试纸条，包括底层的支撑层和中间层的吸附层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、红细胞过滤膜、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层。在所述的纤维素膜层中部有一条包被抗猪附红细胞体的单克隆抗体的检测线和一条包被羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线，采用这种结构的试纸条具有特异性强，操作简便、快速，结果显示直观、准确，减少投资和检测成本，应用范围广等优点，能广泛应用于基层对于猪附红细胞体的检测。

主权项

一种血浆中猪附红细胞体的快速检测胶体金试纸条，包括支撑层（8）和吸附层，吸附层固定在支撑层（8）上，其特征在于：吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层（1）、红细胞过滤膜（2）、金标抗体纤维层（3）、纤维素膜层（6）及吸水材料层（7），在所述的纤维素膜层（6）中部有一条包被抗猪附红细胞体的单克隆抗体的检测线（4）和一条包被羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线（5）；所述的纤维素膜层6一端嵌入金标抗体纤维层（3），另一端嵌入吸水材料层（7）中； 所述胶体金试纸条的制备方法如下：具体步骤： 1）在纤维素膜层的不用位置上分别包被抗猪附红细胞体的单克隆抗体和羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗，分别形成检测线和质控线；具体步骤为：将包被浓度为0.5‑2mg/ml的抗猪附红细胞体的单克隆抗体溶液按1‑2ul/cm的速度喷于检测层上作为检测线，将包被浓度为0.5‑2mg/ml的羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗按1‑2ul/cm的速度喷于检测线下方的检测层上作为质控线，37℃下干燥30‑60min，从而制备得到检测线和质控线； 2）金标抗体纤维层的制备，具体步骤为：以柠檬酸钠还原法制备金溶液，即在100ml沸腾的0.01‑0.02wt%氯金酸水溶液中加入1‑3ml的0.1‑1wt%柠檬酸三钠溶液，可获得直径在10‑25nm左右的胶体金； 通过直接混合的方式以0.2mol/L的K2CO3溶液调节上述获得的胶体金pH至8.0‑9.5，以1：1000‑1500的标记比例将待标记的抗猪附红细胞体的单克隆抗体加入到上述调整pH之后的胶体金中，标记20min后，再向上述标记后的胶体金溶液中加入10wt%的PEG10000水溶液；至PEG10000的终浓度为0.05‑0.1wt%，4℃、3000rpm离心30min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、10000‑13000rpm离心30min，弃上清液，获得初步纯化的金标抗体； 按mg/ml为1：10‑1000的的比例用含0.1‑2wt%BSA的0.001‑0.2mol/L磷酸盐缓冲液稀释胶体金标记的抗猪附红细胞体的单克隆抗体，将上述稀释后的金标抗体液按50ul/cm2的速度喷于玻璃纤维素膜中，4℃低温真空干燥； 3）按前述顺序采用现有工艺和设备组装支撑层、纤维素膜层、金标抗体纤维层、吸水材料层、红细胞过滤膜和样品吸附纤维层既得目标试纸条。