[发明专利]逆境下转基因大豆中致敏蛋白基因表达的检测方法在审
申请号: | 201310724671.8 | 申请日: | 2013-12-24 |
公开(公告)号: | CN103642933A | 公开(公告)日: | 2014-03-19 |
发明(设计)人: | 白吉刚;弯燕燕;周子晴;王秀娟 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明涉及一种逆境胁迫下转基因大豆中致敏蛋白基因表达的检测方法,根据大豆的每种致敏蛋白基因设计荧光定量PCR引物;分别对每种转基因大豆致敏蛋白基因进行荧光定量PCR检测;分别提取逆境胁迫与正常栽培条件下转基因植株以及野生型大豆的总RNA为模板,反转录成cDNA模板。以大豆CYP2基因作为内参,根据各致敏蛋白基因的退火温度设置PCR检测程序,在荧光定量PCR仪上分别对每种致敏蛋白基因进行荧光定量PCR检测;进行逆境胁迫下转基因大豆中致敏蛋白基因表达量的分析。利用本发明能够分析逆境胁迫下转基因大豆中是否具有非预期的致敏性,有助于转基因大豆的生物安全性监测和推广应用,具有重要的经济价值和社会效益。 | ||
搜索关键词: | 逆境 转基因 大豆 中致敏 蛋白 基因 表达 检测 方法 | ||
【主权项】:
一种逆境胁迫下转基因大豆致敏蛋白基因表达的检测方法,其特征在于包括以下步骤:1)根据大豆的每种致敏蛋白基因设计荧光定量PCR引物;2)分别对每种转基因大豆致敏蛋白基因进行荧光定量PCR检测分别提取逆境胁迫与正常栽培条件下转基因植株以及野生型大豆的总RNA为模板,反转录成cDNA模板;以大豆CYP2基因作为内参,根据各致敏蛋白基因的退火温度设置PCR检测程序,在荧光定量PCR仪上分别对每种致敏蛋白基因进行荧光定量PCR检测;3)逆境胁迫下转基因大豆中致敏蛋白基因表达量的分析比较各种致敏蛋白基因在逆境胁迫与正常栽培条件下转基因植株以及野生型大豆之间的表达量差异,分析判断逆境胁迫下的转基因植株中是否具有非预期的致敏性:与正常栽培条件下的植株相比,若各致敏蛋白基因中的一个或多个基因在逆境胁迫的野生型大豆中下调表达,但在逆境胁迫的转基因植株中显著地上调表达,则初步判定该转基因植株为具有致敏性的可疑植株;与正常栽培条件下的植株相比,若一个或多个致敏蛋白基因在逆境胁迫的野生型大豆中上调表达,同时,与逆境胁迫下的野生型大豆相比,这一个或多个致敏蛋白基因的表达量在逆境胁迫的转基因植株中显著地增加,也初步判定该转基因植株为具有致敏性的可疑植株。
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