[发明专利]一种提高荞麦细胞同步化的荞麦细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种提高荞麦细胞同步化的荞麦细胞培养方法，该方法采用先对荞麦愈伤组织细胞进行预处理，再将预处理后的荞麦愈伤组织细胞接入不同的培养基中，在不同的培养条件下进行多环节的同步化诱导处理，可使处于不同分裂时期的细胞调整到特定的细胞分裂期，从而可有效提高诱导子的使用效率，促进培养细胞中的次生代谢物的合成。

主权项

一种提高荞麦细胞同步化的荞麦细胞培养方法，包括荞麦愈伤组织的诱导培养步骤，其特征在于还包括如下步骤：（1）荞麦愈伤组织细胞的预处理：选取产生15～25天、生长良好的荞麦愈伤组织，以10～25g/L的接种量接入改良的Nitsch+2,4‑D1.0～3.0mg/L+水解络蛋白50～150mg/L+谷氨酰胺100～500mg/L的液体培养基中进行悬浮培养，每培养25天继代一次，连续继代2～4次，悬浮培养的条件为：摇床转速120～140r/min、温度20～28℃、每天光照6～10小时和光照强度为500～800lx，所述改良Nitsch培养基是指肌醇浓度为150～300mg/L的Nitsch培养基；（2）荞麦细胞同步化的诱导：将步骤（1）培养的荞麦悬浮细胞接入1/2～1/4MS+2,4‑D1.0～3.0mg/L+6‑BA0.1～0.3mg/L+L+蔗糖50～100g/L+矮壮素0.5～1.0mg/L的液体培养基中，在温度为1～3℃、摇床转速为60～100r/min和无光照的条件下振荡培养12～24h，然后再转接到1/2MS+NAA0.5～2.0mg/L+6‑BA0.1～0.3mg/L+蔗糖10～50g/L+甘露醇1～3g/L的培养基中，在5～10℃、无光照和摇床转速为60～100r/min的条件下振荡培养18～24h，最后转接到B5+NAA1.0～3.0mg/L+6‑BA0.1～0.3mg/L+蔗糖20～40g/L的培养基中，在20～25℃、无光照和摇床转速为60～100r/min的条件下振荡培养24～48h，将培养的细胞用显微观察并计算出细胞的分裂指数。