[发明专利]石斛胚状体悬浮培养工艺

摘要

石斛胚状体悬浮培养工艺。采用野生石斛成株茎段休眠诱导胚状体，在1/4MS矿物盐2.5％蔗糖和0.5％麦芽糖、5％苹果汁、4.5克/升琼脂粉、PH5.8的固体培养基上，25℃±1，生理活性在光照强度为2000lx，光照时间12h/天。通过90～120天连续筛选，最终达到每7天收获一次，多糖含量达到16％以上，比生物生长速率达8～9.5毫克/克·天，可扩增到产量每年10吨以上，并保持周年稳定的扩增体系。

主权项

一种经体外悬浮培养扩增石斛胚状体，其培养过程是：石斛带休眠芽茎段，无菌条件下切取带节的切段，插入到1/4MS矿物盐2.5％蔗糖和0.5％麦芽糖、5％苹果汁、4.5克/升琼脂粉、PH5.8的固体培养基上。25℃±1，生理活性在光照强度为2000lx，光照时间12h/天，经45～50天后，待起始胚状体长到6mm大小时，及时地将胚状体球剥离出外植体，置于相同的上述培养基上扩增。扩增后转入到上述培养基去掉琼脂粉的液体培养基中，进行悬浮培养，每瓶按5％(W/W)接种率接种，90～120转/分回转摇床生长，每8天继代一次；经3‑4次继代后；进入筛选程序，从培养物中不断挑选出浅绿色呈圆球状，生长致密、扩增速度快的胚状体，通过90～120天连续筛选，最终达到每7天收获一次，多糖含量达到16％以上，比生物生长速率达8‑9.5毫克/克·天，并保持周年稳定的扩增体系。