[发明专利]一种基于茎尖的银杏染色体核型分析方法

摘要

本发明公开了一种基于茎尖的银杏染色体核型分析方法；本发明采用新梢上茎尖为试验材料，利用银杏茎尖分生组织细胞分裂旺盛的特点，通过固定、解离、染色、压片等步骤，对嫁接保存的银杏良种资源染色体核型进行分析，结果准确可靠，方法简便，易于操作，对于银杏种质资源的收集、分类、评价和保护具有重要意义。

主权项

一种基于茎尖的银杏染色体核型分析方法，该方法包括下述顺序的步骤：（1）取材在银杏生长旺盛季节的晴朗天气，上午9：00～11：00，下午14：00～16：00，取植株新梢茎尖，由于在野外操作，注意保持材料的干净；（2）预处理预处理的温度，以材料正常生长温度为宜，温度不宜过高，采集的材料立即放入盛有二氯苯的饱和溶液的青霉素小瓶内处理8h；（3）固定将材料冲洗3～4次后放入卡诺固定液中，固定液的体积约为材料的10倍；材料不能装太多，处理的温度以室温为宜；一般固定10～24h，固定后的材料可转入70%乙醇中，于4℃冰箱中保存备用；（4）解离倒去固定液，用蒸馏水漂洗2～3次；在体式显微镜下剥离幼嫩叶取出分生组织部分，放入预热的1mol/L HCl中，60℃水浴中解离10～12min，然后用蒸馏水漂洗2～3次；（5）染色将材料转置到载玻片上，加一小滴改良卡宝品红染液，染色约10min；为了使染色体着色加深，可以用吸水纸把载玻片上的染液吸掉，再滴加染液复染一次；（6）压片在平整的桌面上，先铺上两层柔软的面巾纸，上放一张吸水纸，将带有染色的材料的载玻片放于吸水纸上；用镊子夹取盖玻片，先一端接触到载玻片，然后慢慢轻放，尽量赶走气泡；用左手手指拿吸水纸的一角压住盖玻片的一角，防止盖玻片的滑动，然后用右手持一解剖针，先用针尖轻敲盖玻片，使材料分散均匀，后用吸水纸把多余的染液吸走，最后用针柄再敲击盖玻片，使细胞分散压平；（7）镜检镜检时先用低倍镜如10倍镜下进行观察，找到一个好的视野后再转到高倍镜如40倍镜下观察。看到有合适的细胞后，可滴加香柏油，转到100倍的油镜下观察；观察到有分散良好的中期染色体后，用NikonE200显微镜摄影，用DT2000图像分析系统将图像直接保存于电脑中。