[发明专利]一种人角质干细胞体外诱导分化为人毛囊细胞的方法

摘要

本发明涉及一种人角质干细胞体外诱导分化制备人毛囊细胞的方法。其技术方案：将人角质干细胞移入装有成分确定的角质形成细胞-SFM初始培养液培养皿中进行贴壁培养，得到初始诱导的人角质干细胞，再制备成细胞膜片备用；取小鼠胚胎期13.5天的小鼠头部的下颚，去除下颚第一磨牙的上皮组织，取出牙间充质干细胞组织，吹打成单细胞悬液，离心后重聚成第一磨牙间充质干细胞团。将人角质干细胞膜片与牙间充质干细胞团重聚再植入小鼠肾包膜下继续诱导分化，得到具有毛囊细胞的组织块。本发明可成功将人角质干细胞诱导分化成人毛囊细胞，整体技术和方法既合理高效，又简便实用，人工诱导分化的人毛囊细胞可望通过移植到皮肤，长出毛发。

主权项

一种人角质干细胞体外诱导分化为人毛囊细胞的方法，其特征在于： 1）将人角质干细胞进行复苏后，移入预先装有成分确定的角质形成细胞‑SFM初始培养液的培养皿中；将培养皿放置在CO2气体培养箱进行贴壁培养；当人角质干细胞贴壁生长占据培养皿底面积的50～60%时，将初始培养液替换为诱导培养液，进行初始诱导，得到初始诱导的人角质干细胞，再制备成细胞膜片备用； 2）切取小鼠胚胎期13.5天的小鼠头部的下颚，在2.0 U/ml的中性蛋白酶中消化30分钟，于体式显微镜下去除下颚第一磨牙的上皮组织，取出下颚第一磨牙间充质干细胞组织；将下颚第一磨牙间充质干细胞组织在高糖Dulbecco改良Eagle培养基中吹打成单细胞悬液，用细胞计数板取1～2×106个细胞，200×g离心5分钟，重聚成第一磨牙间充质干细胞团；3）将备用的初始诱导的人角质干细胞膜片，与分离好的小鼠头部的下颚第一磨牙间充质干细胞团体外重聚成嵌合细胞块，再将嵌合细胞块植入Balb/c免疫缺陷小鼠肾包膜下继续进行诱导分化，得到含有毛囊细胞的毛囊细胞组织块。