[发明专利]超嗜热聚合酶可实现的邻近延伸分析

摘要

本发明涉及针对样品中分析物进行的基于邻近探针的检测分析(“邻近分析”)，特别是邻近探针延伸分析(PEA)，且尤其是涉及对降低非特异性“背景”信号的方法进行的改进，其中改进包括在这样的分析中使用超嗜热聚合酶，所述方法包括(a)将样品与至少第一和第二邻近探针的至少一组接触，每个探针包括分析物结合结构域和核酸结构域，并能够同时结合至分析物；(b)在邻近探针与分析物结合时，使邻近探针的核酸结构域彼此相互作用，其中所述相互作用包括双链体的形成；(c)延伸所述双链体的至少一个核酸结构域的3’端以生成延伸产物，其中，延伸反应包括将分析的温度提高至超过室温并使用聚合酶，所述聚合酶的特征在于40℃时其具有小于最大酶活性的20％的活性且25℃时其具有小于最大酶活性的10％的活性，其中，所述聚合酶的最大活性的最适温度是高于40℃，且所述聚合酶选自强烈火球菌(Pfu)DNA聚合酶和沃氏火球菌(Pwo)DNA聚合酶，或者它们的衍生物或突变体，优选地其中所述衍生物是序列‑修饰的衍生物；和(d)扩增和检测延伸产物。

主权项

一种检测样品中分析物的非诊断目的的方法，包括：(a)将所述样品与至少第一和第二邻近探针的至少一组接触，每个探针包括分析物结合结构域和核酸结构域，并能够同时结合至分析物；(b)在所述邻近探针与所述分析物结合时，使邻近探针的核酸结构域彼此相互作用，其中所述相互作用包括双链体的形成；(c)延伸所述双链体的至少一个核酸结构域的3’端以生成延伸产物，其中，延伸反应包括将分析的温度提高至至少30℃并使用聚合酶，所述聚合酶的特点是40℃时其具有小于或等于最大酶活性的20％的活性，且25℃时其具有小于或等于最大酶活性的10％的活性，其中，所述聚合酶的最大活性的最适温度是高于40℃；和(d)扩增和检测延伸产物；其中，在步骤(c)中，所述聚合酶选自Pfu DNA聚合酶，Pwo DNA聚合酶，或者，所述聚合酶由SEQ ID NO:2的多肽序列构成。