[发明专利]抗体及其Fc片段的化学酶法糖基化工程

摘要

本发明提供了用于糖蛋白合成、具有降低的水解活性和提高的糖基转移活性的重组Endo‑S突变体，在所述糖蛋白合成中，向核心岩藻糖基化或非岩藻糖基化的GlcNAc‑蛋白受体添加所需的唾液酸化噁唑啉或合成寡糖噁唑啉。这样的重组Endo‑S突变体可用于IgG1‑Fc结构域的高效糖基化重塑，以提供带有结构明确的Fc N‑聚糖的不同的抗体糖型。

主权项

一种制备具有预定寡糖组成部分的核心岩藻糖基化或非岩藻糖基化的抗体或其Fc片段的方法，所述方法包括：提供包含核心岩藻糖基化或非岩藻糖基化的GlcNAc‑受体的抗体或Fc片段；并且使用酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）内切糖苷酶‑S Asp233突变体，将所述核心岩藻糖基化或非岩藻糖基化的 GlcNAc‑受体与活化的寡糖供体进行酶反应，其中内切糖苷酶‑S Asp233突变体选自：包含D233Q定点突变的突变体，即SEQ ID NO:2，或包含D233A定点突变的突变体，即SEQ ID NO：3，其中所述活化的寡糖供体带有包含预定数目和类型的糖残基的寡糖组成部分，其中通过酶反应，所述活化的寡糖组成部分被共价连接到所述核心岩藻糖基化或非岩藻糖基化的GlcNAc‑受体，由此制备具有预定的寡糖组成部分的、岩藻糖基化或非岩藻糖基化的抗体或Fc片段。