[发明专利]突变的头孢菌素羟化酶及其在脱乙酰基头孢菌烷酸合成中的应用

摘要

本发明涉及一种用于生成苯乙酰基‑7‑HACA衍生物的突变型羟化酶，所述突变型羟化酶具有增加的活性和对苯乙酰基‑7‑ADCA衍生物具有更高的底物特异性，所述突变型羟化酶与野生型羟化酶相比具有一个或多个在来自以下残基的残基位置上的氨基酸修饰位置7的脯氨酸、位置40的丙氨酸、位置51的苏氨酸、位置53的甲硫氨酸、位置82的谷氨酸、位置91的精氨酸、位置96的苏氨酸、位置108的甘氨酸、位置149的异亮氨酸、位置171的缬氨酸、位置177的丙氨酸、位置182的精氨酸、位置184的甲硫氨酸、位置193的异亮氨酸、位置195的苯丙氨酸、位置209的谷氨酰胺、位置210的丙氨酸、位置226的缬氨酸、位置233的甲硫氨酸、位置236的亮氨酸、位置237的丙氨酸、位置241的丙氨酸、位置249的缬氨酸、位置250的精氨酸、位置251的丝氨酸、位置255的甘氨酸、位置258的谷氨酸、位置260的丝氨酸、位置267的苯丙氨酸、位置280的丙氨酸、位置307的缬氨酸和位置313的天冬酰胺。本发明还提供一种使用本发明的酶从对应的脱乙酰氧基头孢菌烷酸制备脱乙酰基头孢菌烷酸的方法。本发明还提供了用于生产和处理这类酶的方法。

主权项

一种突变型羟化酶，其中氨基酸置换位于选自以下的序列SEQ ID NO:1的野生型羟化酶的残基位置处：i)A40V,P72L,T90A,A311Vii)A40V,P72L,T90A,T273A,A311Viii)A40V,P72L,T90A,A237V,T273A,A311Viv)A40V,P72L,T90A,M229I,T273A,A311Vv)A40V,P72L,T90A,M229I,F267L,T273A,A311Vvi)A40V,P72L,T90A,A177V,M229I,F267L,T273A,A311Vvii)A40V,P72L,T90A,F195L,M229I,F267L,T273A,A311Vviii)A40V,P72L,T90A,M184I,I193V,M229I,T273A,A311Vix)A40V,P72L,T90A,V171L,M229I,T273A,A311Vx)A40V,P72L,T90A,Q209E,M229I,V249I,T273A,A311Vxi)A40V,P72L,T90A,Q209E,M229I,T273A,A311Vxii)A40V,P72L,E82D,T90A,Q209E,M229I,L236V,V249I,T273A,A311Vxiii)A40V,P72L,T90A,V221P,M229I,T273A,A311Vxiv)A40V,P72L,T90A,V221H,M229I,T273A,A311Vxv)A40V,P72L,T90A,R182S,M229I,T273A,A311Vxvi)A40V,P72L,T90A,A177V,M229I,T273A,A311Vxvii)A40V,P72L,T90A,V171M,M229I,T273A,A311Vxviii)A40V,P72L,T90A,M229I,S260G,T273A,A311Vxix)A40V,P72L,T90A,M229I,S251F,T273A,A311Vxx)A40V,P72L,T90A,F195L,M229I,T273A,A311Vxxi)A40V,P72L,T90A,V226I,M229I,T273A,A311Vxxii)A40V,P72L,T90A,M229I,R250L,T273A,A311Vxxiii)A40V,P72L,T90A,M229I,E258K,T273A,A311Vxxiv)A40V,P72L,T90A,M229I,M233I,T273A,A311Vxxv)A40V,P72L,T90A,F195L,V226I,M229I,T273A,A311Vxxvi)A40V,P72L,T90A,F195L,R250L,M229I,T273A,A311Vxxvii)A40V,P72L,T90A,V226I,M229I,R250L,T273A,A311Vxxviii)A40V,P72L,T90A,M184I,I193V,M229I,F267L,T273A,A311Vxxix)A40V,P72L,T90A,M184I,I193V,M233I,M229I,F267L,T273A,A311Vxxx)A40V,P72L,T90A,V171L,M229I,F267L,T273A,A311Vxxxi)A40V,P72L,T90A,V171L,F195L,M229I,F267L,T273A,A311Vxxxii)A40V,P72L,T90A,V171L,M229I,M233I,F267L,T273A,A311Vxxxiii)A40V,P72L,T90A,V171L,M229I,E258K,F267L,T273A,A311Vxxxiv)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Vxxxv)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311V,N313Dxxxvi)A40V,P72L,T90A,V171L,A177V,R182W,M229I,F267L,T273A,A311V,N313Dxxxvii)A40V,P72L,T90A,R91G,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Vxxxviii)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,G255D,F267L,A280S,T273A,A311V,xxxix)A40V,M53L,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Mxl)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,V226I,M229I,F267L,T273A,A311Vxli)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,A241V,F267L,T273A,V307A,A311Vxlii)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Mxliii)A40V,P72L,T90A,T96S,I149T,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Vxliv)A40V,P72L,T90A,V171L,A177V,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Vxlv)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,S251F,F267L,T273A,A311Vxlvi)A40V,P72L,T90A,V171L,R182W,M229I,S260G,F267L,T273A,A311Vxlvii)A40V,P72L,T90A,R91G,V171L,R182W,M229I,A241V,F267L,T273A,V307A,A311Vxlviii)A40V,P72L,T90A,R91G,V171L,R182W,M229I,G255D,F267L,T273A,A280S,A311Vxlix)A40V,P72L,T90A,T96S,V171L,R182W,M229I,G255D,F267L,T273A,A280S,A311Vl)A40V,P72L,T90A,T96S,V171L,R182W,M229I,A241V,F267L,T273A,V307A,A311Vli)A40V,P72L,T90A,T96S,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311Vlii)A40V,P72L,T90A,G108D,V171L,R182W,M229I,F267L,T273A,A311V。