[发明专利]用于分子计数的组合物和试剂盒有效
| 申请号： | 201380022187.9 | 申请日： | 2013-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN104364392B | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 格伦·K·弗;斯蒂芬·P·A·福多尔;朱莉·威廉米 | 申请（专利权）人： | 赛卢拉研究公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6874;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 牟静芳;郑霞 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本文公开了用于分析样品中的一个或多个分子的方法、试剂盒和系统。分析一个或多个分子可包括对所述一个或多个分子进行定量。单个分子可以通过PCR、阵列、珠粒、乳液、小滴或测序进行定量。单个分子的定量还可包括使用多个寡核苷酸标签对一个或多个分子进行随机标记，以生成一个或多个随机标记的分子。该方法还可包括对随机标记的分子进行扩增、测序、检测和/或定量。该分子可以是DNA、RNA和/或蛋白质。 | ||
| 搜索关键词： | 随机标记 单个分子 试剂盒 测序 寡核苷酸标签 分析样品 扩增 乳液 小滴 珠粒 蛋白质 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种确定样品中mRNA分子的出现次数的方法，其包括：(a)使用多个寡核苷酸标签随机标记样品中的多个mRNA分子的出现的mRNA分子以产生多个标记的mRNA分子，(i)其中所述多个mRNA分子包括具有不同序列的mRNA分子，(ii)其中所述多个寡核苷酸标签中的每个寡核苷酸标签包含oligo dT序列、标识符区域和通用引物结合位点，(iii)其中所述多个寡核苷酸标签包括至少10个具有不同序列的标识符区域的寡核苷酸标签，所述标识符区域用于确定所述多个mRNA分子的mRNA分子的出现次数，且(iv)其中所述多个寡核苷酸标签中具有不同序列的标识符区域的寡核苷酸标签的数目是所述多个mRNA分子的任何mRNA分子的出现次数的至少10倍；(b)通过使所述多个标记的mRNA分子与逆转录酶接触进行第一链合成反应，以产生多个标记的单链cDNA分子；(c)扩增所述多个标记的单链cDNA分子以产生多个标记的双链cDNA分子；(d)对所述多个标记的双链cDNA分子进行巢式聚合酶链反应(PCR)，以产生多个标记的巢式PCR扩增子；和(e)检测所述多个标记的巢式PCR扩增子的至少一部分扩增子以确定关联于所述多个标记的mRNA分子的每一个的不同的标识符区域的数目，从而确定样品中所述多个mRNA分子的mRNA分子的出现次数，其中所述方法用于非诊断目的。
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