[发明专利]核酸酶介导的使用大靶向载体的靶向有效
| 申请号： | 201380030738.6 | 申请日： | 2013-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN104364380B | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | D·弗伦德维;W·奥尔巴克;D·M·瓦伦泽拉;G·D·扬科普洛斯;K·V·莱 | 申请（专利权）人： | 瑞泽恩制药公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C07K14/715 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 邬玥;葛强 |
| 地址： | 美国*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本申请提供了通过使用同源重组在基因组的靶基因座制备一种或多种经靶向的基因修饰的组合物和方法，其中通过在所述靶基因组的基因座或其附近的单链或双链的断裂促进所述同源重组。本申请还提供了使用工程改造的核酸酶在原核或真核细胞中提高LTVEC和基因组的靶基因座之间同源重组效率的组合物和方法。 | ||
| 搜索关键词： | 核酸酶 使用 靶向 载体 | ||
【主权项】：
1.一种在小鼠胚胎干（ES）细胞中修饰基因组的靶基因座的方法，所述方法包括：（a）引入所述小鼠胚胎干（ES）细胞：（i）锌指核酸酶（ZFN），所述锌指核酸酶在基因组的靶基因座或其附近产生单链或双链断裂；和（ii）大靶向载体（LTVEC），所述大靶向载体包含翼侧为上游同源臂和下游同源臂的插入核酸，其中所述插入核酸的长度为5kb至30kb，其中所述上游同源臂和所述下游同源臂的总和是至少10kb，其中所述上游同源臂和所述下游同源臂的长度为5kb至200kb，并且其中所述LTVEC的长度范围为50kb至300kb；以及（b）选择经靶向的小鼠胚胎干（ES）细胞，所述小鼠胚胎干（ES）细胞包含在所述基因组的靶基因座中的所述插入核酸，其中将所述插入核酸整合进入所述基因组的靶基因座使得所述插入核酸取代所述基因组的靶基因座处的内源核酸序列，其中与单独使用LTVEC相比，联合使用所述LTVEC与所述ZFN使得靶向效率增加。
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