[发明专利]核酸扩增有效
申请号: | 201380031868.1 | 申请日: | 2013-03-15 |
公开(公告)号: | CN104471075B | 公开(公告)日: | 2018-06-22 |
发明(设计)人: | C-Y·李;D·拉夫;S-M·陈;J·奥尼尔;R·卡辛斯卡斯;J·罗恩伯格 | 申请(专利权)人: | 生命技术公司 |
主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686 |
代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人: | 李程达 |
地址: | 美国加*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | 在一些实施方案中,本教导内容提供了用于核酸扩增的方法,包括形成反应混合物,和使反应混合物经历适合于核酸扩增的条件。在一些实施方案中,用于核酸扩增的方法包括使待被扩增的核酸经历部分变性条件。在一些实施方案中,用于核酸扩增的方法包括在不完全变性被扩增的核酸的情况下进行扩增。在一些实施方案中,用于核酸扩增的方法使用催化同源重组的酶和聚合酶。在一些实施方案中,可在单个反应容器中进行用于核酸扩增的方法。在一些实施方案中,可在反应混合物的单一连续液相中进行用于核酸扩增的方法,而无需反应混合物的区室化或反应组分的固定。在一些实施方案中,用于核酸扩增的方法包括任选地在存在聚合物的情况下,在等温扩增条件下在表面上扩增至少一个多核苷酸。聚合物可包括筛分剂和/或扩散减少剂。 | ||
搜索关键词: | 核酸扩增 扩增 聚合物 核酸 单个反应容器 变性条件 等温扩增 多核苷酸 方法使用 内容提供 同源重组 减少剂 聚合酶 筛分剂 变性 区室 催化 扩散 | ||
【主权项】:
1.用于核酸扩增的非诊断目的的方法,包括:(a)将至少两个多核苷酸分配至支持物上的多个位点中,所述支持物包含第一固定引物,其中第一多核苷酸被分配至第一位点并且第二多核苷酸被分配至第二位点,其中所述至少两个多核苷酸具有不同的序列,其中所述至少两个多核苷酸各自包含第一引物结合部位和第二引物结合部位,并且其中第一引物结合部位能杂交至第一固定引物,第二引物结合部位能杂交至溶液中的第二引物;(b)通过在第一固定引物和溶液中的第二引物的存在下扩增所述至少两个位点内的多核苷酸来形成至少两个基本上单克隆的核酸群,其中所述至少两个位点在扩增期间彼此流体连通,其中所述扩增发生于连续液相,其中所述扩增包括:将所述至少两个多核苷酸与单个反应混合物接触,所述单个反应混合物包含:用于核酸合成的试剂、重组酶和一种或多种辅助蛋白,其中所述用于核酸合成的试剂包含聚合酶和多种核苷酸,所述一种或多种辅助蛋白包括重组酶载入因子和/或单链结合蛋白;和(c)其中所述反应混合物还包含筛分剂,所述筛分剂限制或减缓多核苷酸扩增产物通过反应混合物迁移。
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