[发明专利]无染色剂蛋白定量和标准化

摘要

本发明公开了使用卤烷基化色氨酸荧光进行蛋白定量和标准化的方法。使用与色氨酸残基反应以形成荧光产物的卤代有机化合物(即卤代烷)处理来自没有共同蛋白分布的多种来源的复杂的蛋白样品(即各自含有1000或更多种不同蛋白的样品)。随后使用紫外光对样品进行辐照并对所得来自各样品中所有蛋白的荧光发射进行检测和定量以获得多个样品之间总蛋白含量的可比数值。发现如此获得的数值是比较性总蛋白含量的有效指标，尽管由于来源各异，色氨酸水平在任何单个样品的多种蛋白和样品间存在广泛差异，这将倾向于在特性和所含蛋白的相对量方面对其自身进行区分。还对蛋白样品进行标准化以校正样品稀释、样品加载和蛋白转移不一致造成的差异，方法为对各样品中总蛋白进行无染色剂检测或对各样品中的子样品进行检测。

主权项

一种使用测得的卤烷基化色氨酸荧光对目标蛋白样品中蛋白总量进行定量的方法，所述方法包括：对目标蛋白样品和多个参考蛋白样品，将所述的蛋白样品暴露于UV光，同时使所述的蛋白样品与卤代有机化合物接触，从而使所述蛋白样品中的色氨酸残基与卤代有机化合物发生共价反应，并检测所述蛋白样品中蛋白质发射的荧光，其中所述的荧光是卤烷基化色氨酸荧光；对各个参考蛋白样品，提供所述参考蛋白样品中的蛋白总量并对从所述参考蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量；对从所述目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量；以及基于所述参考蛋白样品中的蛋白总量和从所述参考蛋白样品和所述目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光的量，对所述目标蛋白样品中的蛋白总量进行定量，其中所述目标蛋白样品包含50或更多种不同的蛋白，所述参考蛋白样品包含50或更多种不同的蛋白。