[发明专利]新的酶、酶组合物及其用途

摘要

本发明提供了编码来自金黄色破囊壶菌和Sphaeroforma arctica的新的脂肪酸去饱和酶、KCS、KCR和/或LACS的核酸分子。本发明还提供了含有所述核酸分子的重组表达载体、已经向其中引入表达载体的宿主细胞，和用于大规模产生长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)，例如ARA、EPA和DHA和用于筛选δ-4去饱和酶的方法。

主权项

δ‑4去饱和酶多肽，其选自：a)与SEQ ID NO.79、86或85任一个的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性的δ‑4去饱和酶多肽，其中所述序列优选还包含‑选自“KHPGG”、“QHPGG”或“RHPGG”的基序，优选选自“KHPGGD”、“QHPGGD”或“RHPGGD”的基序，和‑选自“GLNIQHDXNHG”或“HVVGHH”的基序，优选选自“AAIGLNIQHDANHG”或“QHVVGHH”的基序，或b)具有氨基酸序列SEQ ID NO.85和任选地一个或多个以下突变的δ‑4去饱和酶多肽：H4S、H4Y、H4Q、H4E、H4N、A5S、A5G、A5C、A5P、A5T、A5V、A6R、A6G、A6K、A6S、A6N、T7K、T7S、T7R、T7N、T7A、T7G、K8E、K8D、K8R、K8Q、V9‑、V9I、V9L、V9A、G10V、G10I、G10A、G10M、G10C、G11S、G11N、G11D、G11A、G11K、D12‑、S13‑、D14A、D14V、D14I、D14E、D14G、D14P、P15A、P15G、P15S、P15V、P15T、R18K、R18S、R18T、R18A、R18Q、D19A、D19G、D19P、D19S、L20‑、K21‑、M22A、M22L、M22I、M22V、E23K、E23R、E23Q、H24Y、H24F、H24I、H24M、H24L、H24Q、H24R、H24V、F25Y、F25W、F25I、F25A、S26T、S26A、S26C、S26G、S26N、Y27R、Y27F、E28T、E28D、E28N、E28S、R29K、R29E、R29Q、R29D、I30K、I30L、I30V、L31A、L31I、N32D、N32G、N32H、N32S、N32T、N32R、N32K、N32E、N32Q、N32A、N32V、D33H、D33N、D33T、E34T、E34N、E34D、E34Q、E34R、R35N、R35K、R35H、D36P、D36E、D36N、D36S、D37E、D37K、L38I、L38V、L38M、L38F、L38Y、C39T、C39A、C39S、C39V、V41L、V41I、V41M、V41T、G42A、G42D、G42E、G44A、A48S、A48C、A48L、A48R、A48K、T49S、T49V、T49N、T49P、T49K、T49A、A50C、A50N、A50G、D53E、D53N、K54Q、K54R、A59‑、D60E、D60N、D60H、F61Y、F61W、F61V、F61I、V62L、V62I、V62M、V62A、V62T、D63S、D63N、D63E、L64I、L64F、L64M、G66P、R68Q、R68H、R68D、R68N、P72E、P72D、P72Q、H73G、H73A、H73N、H73S、F75W、F75M、F75Y、E76Q、E76M、E76H、Y77F、Y77W、Y77H、Y77L、R79K、R79Q、R79H、R80H、R80K、R80Q、R80Y、R80N、E81A、E81V、E81Q、E81L、E81P、W82G、W82S、P83D、P83V、P83K、P83A、P83T、P83E、P83Q、P83M、P83L、P84K、P84R、A85S、A85G、A85C、A85T、A85P、A85V、V86I、V86L、V86M、V86R、V86A、V86T、L87M、L87I、L87V、L87F、A88S、A88C、A88G、K89R、K89E、K89Q、K89P、K89N、Y90F、Y90W、K91F、K91G、K91Y、K91L、K91W、L95I、L95V、L95M、D96A、D96E、D96G、D96P、R97K、R97P、R97Q、R97H、R97E、R97A、D98E、D98N、D98S、D99E、D99Q、S100K、S100G、S100N、S100P、Y101F、Y101W、Y101H、Y101P、V102T、V102I、V102L、Q103H、Q103E、Q103R、Q103N、Q103K、Q103D、Q103Y、H104A、H104Y、H104V、H104I、H104F、H104R、D105E、D105P、D105T、S106P、S106E、S106A、S106D、S106N、S106T、G107L、G107I、G107M、G107A、Y108H、Y108Q、Y108W、Y108M、Y108V、L109K、L109M、L109I、L109V、R110Q、R110K、R110H、R110E、L111I、L111F、C112G、C112A、C112N、C112S、C112K、A113C、A113S、A113G、E114D、E114Q、E114P、E114S、E114K、E114A、N116R、N116D、N116H、G117A、G117K、G117R、G117S、I118L、I118V、L119I、L119M、K121R、K121M、K121Q、K121L、G122W、G122Q、G122N、S123E、S123D、S123N、S123G、G124W、G124A、G124N、G125‑、W126F、P129A、P129G、W131Y、W132Y、I133L、I133V、C136A、C136G、C136S、L138I、L138V、L138M、L139I、L139V、L139M、V140A、V140I、V140L、V140C、V140M、A142T、A142P、A142S、A142G、L143I、L143V、Y144F、Y144H、Y144W、Y144S、Y144T、L145I、L145V、L145M、L145F、L145T、D146E、D146N、D146Q、Y147W、Y147F、Y147H、Y147G、Y148F、Y148H、Y148L、M149W、M149L、M149I、M149F、L150I、L150V、A151L、A151C、A151G、A151S、R152K、R152S、R152N、R152Q、R152D、P154K、P154E、P154R、I156L、I156V、L157F、L157I、L157M、L157Y、L157W、L157P、A159S、A159G、A159C、A159T、A159P、A159V、I160V、I160L、I161V、I161L、I161F、L162I、L162V、L162M、L162F、L162C、L162A、L162T、L162S、L165I、L165V、F166Y、W168G、W168A、W168C、A181S、A181G、A181C、A181T、A181P、A181V、L182I、L182V、L182M、N185H、N185Y、P186S、V187M、V187A、V187I、V187P、V188I、V188L、V188A、V188T、Y190R、Y190H、Y190W、L191C、L191I、F192L、F192I、A195S、A195G、A195M、A195Q、A195K、S202N、S202G、S202D、S202T、S202A、S202K、M203R、M203L、M203Q、M203I、M204L、M204V、M204I、M204Q、M204C、L207I、L207V、Q208R、Q208E、Q208K、Q209E、Q209K、Q209R、Q209D、Q209H、G213N、G213A、G213S、G213K、G213D、G213W、G213M、L216I、L216F、L216T、T218C、T218S、T218V、T218A、T218N、T218P、D220E、D220N、D220R、D220G、I221V、I221F、I221Y、I221H、D222N、D222Q、D222P、H223Y、H223F、H223Q、H223W、H223R、H223E、H223N、H223M、H223V、H223P、H223I、H223L、H223D、H223A、V227I、V227L、V227M、V227A、V227T、V227Q、G229A、G230H、G230N、G230D、G231S、G231N、G231A、A232V、A232T、A232I、A232G、L233I、L233V、R234K、R234Q、R234N、R234E、R234H、R234T、K236S、K236G、K236A、K236T、P237K、P237D、P237E、P237R、T238V、T238S、T238P、T238N、T238A、T238I、T238Y、D239S、D239G、D239E、G240I、G240L、G240F、G240C、G240M、G240S、W241F、W241Y、W241P、L242M、L242I、L242V、L242F、L242K、P243E、P243D、W244F、H246A、H246S、H246Y、H246G、H246N、L247I、L247V、L250I、L250V、L250M、L250F、L250Y、F252I、F252Y、L255G、L255M、L255A、L255K、L255C、L255F、E256D、E256Q、E256K、E256P、E256R、E256N、E256S、E256V、E256A、E256T、E256G、E256H、E256I、A257V、A257Q、A257L、A257C、A257P、A257E、L258M、L258I、Y259F、Y259W、Y259H、Y259L、G260A、G260C、K262Q、K262R、W263L、W263F、V264I、V264L、V264M、V264F、F265Y、F265W、F265H、F265S、D267G、L268A、L268I、L268V、H269N、H269Q、H269R、H269L、E270D、E270Q、E270K、L272I、L272F、E273D、E273A、E273G、E273P、W274F、W274Y、W274M、K275R、K275E、K275Q、W276Y、E277K、E277D、E277R、P280K、P280R、I281L、I281V、P282S、P282D、P282N、P282G、P283E、P283D、P283Q、L284I、L284M、L284V、L284C、L284A、L284T、L284S、A285Y、A285C、A285F、A285V、A285S、A285L、R286K、R286Q、R286H、R286E、R286L、R286M、R286V、R286A、P287K、P287D、P287E、P287G、P287Q、P287S、P287R、P287A、E288D、E288L、E288K、E288V、E288Q、F289Y、F289R、F289H、A290G、A290S、A290N、A290C、P291I、V293I、V293L、G294A、G294S、G294P、G294N、G294K、G294R、G294E、G294D、G294Q、G294T、G294H、G294C、G294W、G294M、G294Y、G294V、C295L、C295I、K296R、K296E、K296Q、K296N、K296P、L297I、L297V、G298F、G298A、G298W、G298S、W300F、A301V、A301C、A301G、A301S、A301P、A301I、F303Y、F303W、F303K、V304I、V304F、V304L、V304Y、A305V、A305I、A305L、A305T、A305C、L306I、L306V、L306M、L308F、L308I、W309A、W309G、H311Q、H311E、H311R、H311Y、H311N、P312F、P312Y、S313T、S313N、S313G、S313A、W314F、W314L、W314Y、W314I、W314M、W314V、H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