[发明专利]用于检测核苷酸变异的核酸酶保护方法

摘要

本文公开的是利用核酸酶保护测定来检测靶核酸中核苷酸变异的存在的方法。所述方法包括在足以使探针与靶核酸杂交的条件下，使样品与至少两种探针接触，其中第一探针与靶核酸中核苷酸变异位置处的野生型(非变异)核苷酸互补，第二探针与靶核酸中核苷酸变异位置处的变异核苷酸互补，产生杂交的和未杂交的核酸的混合物。在足以移除未杂交的核酸分子(或核酸分子的未杂交部分)的条件下，使所述混合物与特异性针对单链核酸分子的核酸酶接触。然后检测所述至少两种探针的存在，从而检测所述样品中变异和/或非变异靶核酸的存在。

主权项

1.一种检测样品中靶核酸分子中的核苷酸变异的存在的非诊断方法，包括：使所述样品与至少两种与包含核苷酸变异的靶核酸分子的相同链互补的探针在足以使第一探针和第二探针与所述靶核酸分子杂交的条件下接触，产生杂交的核酸分子和未杂交的核酸分子的混合物，其中所述第一探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与野生型互补，其中所述靶核酸分子核苷酸变异位置距所述第一探针的3’末端两个至六个碱基，其中所述第二探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与第一变异互补，其中所述靶核酸核苷酸变异位置距所述第二探针的5’末端两个至六个碱基，并且其中所述第一和第二探针仅在所述第一探针的3’末端和所述第二探针的5’末端所述变异位置的区域处重叠；或者其中所述第一探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与野生型互补，其中所述靶核酸分子核苷酸变异位置距所述第一探针的5’末端两个至六个碱基，其中所述第二探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与第一变异互补，其中所述靶核酸核苷酸变异位置距所述第二探针的3’末端两个至六个碱基，并且其中所述第一和第二探针仅在所述第一探针的5’末端和所述第二探针的3’末端所述变异位置的区域处重叠；在足以移除未杂交的核酸分子的条件下，使杂交的核酸分子和未杂交的核酸分子的混合物与特异性针对单链核酸分子的核酸酶接触；并且检测所述混合物中至少两种探针中的一种或多种探针的存在，从而检测所述样品中核苷酸变异的存在。