[发明专利]多能哺乳动物细胞的体外胰腺分化

摘要

本发明涉及多能细胞在体外分化为胰腺祖细胞，通过i)在定形内胚层(DE)培养基中培养多能细胞以生成定形内胚层细胞的细胞群，该培养基包括TGFβ配体、成纤维细胞生长因子(FGF)、骨形态发生蛋白(BMP)、PI3K抑制剂和可选的GSK3β抑制剂，ii)在第一胰腺培养基中培养定形内胚层细胞以生成背侧前肠细胞的细胞群，所述第一胰腺培养基含有激活素拮抗剂；FGF；视黄酸；和BMP抑制剂；iii)在第二胰腺培养基中培养所述背侧前肠细胞，所述第二胰腺培养基含有FGF、视黄酸、BMP抑制剂和hedgehog信号传导抑制剂，以及；iv)在第三胰腺培养基中培养内胚层细胞，所述第三胰腺培养基含有FGF。这样生成的祖细胞可以进一步分化成胰腺内分泌细胞。这些方法可能是有用的，例如，在生成胰腺细胞用于治疗或疾病建模时。

主权项

1.一种产生胰腺祖细胞的细胞群的方法，包括：i)提供人类诱导多能干(iPS)细胞的细胞群；ii)在定形内胚层(DE)诱导培养基中培养所述细胞群，以产生定形内胚层细胞的细胞群，其中，所述定形内胚层(DE)诱导培养基是一种化学成分确定的培养基，它包括TGFβ配体、成纤维细胞生长因子(FGF)、骨形态发生蛋白(BMP)、PI3K抑制剂和可选的GSK3β抑制剂；iii)在第一胰诱导培养基中培养所述定形内胚层细胞的细胞群，以产生背侧前肠细胞的细胞群，其中，所述第一胰诱导培养基是一种化学成分确定的培养基，它包括激活素拮抗剂；FGF；视黄酸；和BMP抑制剂；iv)在第二胰诱导培养基中培养所述背侧前肠细胞，其中，所述第二胰诱导培养基是一种化学成分确定的培养基，它包括FGF、视黄酸、BMP抑制剂和hedgehog信号传导抑制剂；v)在第三胰诱导培养基中培养在步骤iv)中产生的细胞，其中，所述第三胰诱导培养基是一种化学成分确定的培养基，它包括FGF；从而产生胰腺祖细胞的细胞群。