[发明专利]小鼠脂肪干细胞自发转化的鉴定方法

摘要

本发明公开了小鼠脂肪干细胞自发转化的鉴定方法，将小鼠脂肪干细胞在体外连续传代，然后包括形态学的变化、增殖速度的激增、异常染色体的出现和比例的增加、DNA含量的降低以及表面分子的变化五个步骤。其中形态学和增殖速度的观察与检测可用于初步的判断小鼠脂肪干细胞是否发生了转化；染色体的核型分析从局部水平上来分析小鼠脂肪干细胞染色体是否异常，而DNA含量的分析则从整体水平上来检测核物质的量变，此二法最能说明小鼠脂肪干细胞的转化与否；小鼠脂肪转化后，同时也引起小鼠脂肪干细胞典型分子的表达异常，包括CD44，CD105和Sca-1的变化，反而言之，后期研究中，也可以通过监测这些表面分子的变化来判断小鼠脂肪干细胞的转化，此法则更为简单、直接与有效。

主权项

小鼠脂肪干细胞自发转化的鉴定方法，其特征在于：对小鼠脂肪干细胞分离与培养，将小鼠脂肪干细胞在体外连续传代，同时进行包括以下步骤的操作： （1）形态学观察：分别观察低代次正常细胞，初见衰老时的细胞和越过衰老后细胞的形态，从形态学上观察越过衰老后细胞是否出现异常；（2）增殖速度检测:分别绘制低代次正常细胞，初见衰老时的细胞和越过衰老后细胞的生长曲线，计算各自的细胞倍增时间，从增殖速度的角度观察越过衰老后细胞是否出现异常；（3）染色体形态与数量分析：分别对低代次的正常细胞和越过衰老后的细胞进行低渗，固定和破核处理，释放出染色体后，用Giemsa染色法，分别对这两种细胞的染色体进行染色，显微镜下统计每个细胞染色体的数量以及染色体的形态特征；（4）DNA的含量分析：分别消化低代次的正常细胞和越过衰老后的细胞，PI染色后，用流式细胞仪分别检测这两种细胞内DNA的含量，观察越过衰老后的细胞的DNA含量是否有明显的变化；（5）表面分子的表达：分别消化低代次的正常细胞和越过衰老后的细胞，分别用针对CD44，CD105和Sca‑1的荧光抗体与细胞结合，再用流式细胞仪检测这两种细胞中CD44，CD105和Sca‑1的阳性率和表达强度，通过其变化来检测小鼠脂肪干细胞是否发生了转化。