[发明专利]一种昆虫幼虫石蜡切片方法

摘要

本发明公开了一种昆虫幼虫石蜡切片方法，属于显微组织切片技术领域。该方法包括组织固定、组织脱水、组织透明、浸蜡、包埋与切片、展片与粘片、脱蜡和组织复水等步骤，操作简单、耗时短，最终切片对组织区分度高，能观察到虫体完整的空间结构，适用于身体柔软、液体含量高、腔室比例大的幼虫虫体材料。采用该方法处理3龄棉铃虫幼虫虫体，在明场下观察其体壁完整，体腔内部的肌肉组织、神经组织等分布其间，占身体比例大的消化道结构清晰完整，一对腹足的空间结构正常；在蓝光激发下，能够观察到各器官组织被激发的自发绿色荧光水平。

主权项

一种昆虫幼虫石蜡切片方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）组织固定：取昆虫虫体浸于组织固定液中，抽真空并保持负压10～30分钟，再于4℃下静置10～14小时；（2）组织脱水：取组织固定后的虫体，4℃条件下，依次用浓度梯度为50%、60%、70%、90%、100%的乙醇溶液脱水，每个梯度的处理时间至少为1小时；（3）组织透明：取组织脱水后的虫体，室温下在组织透明剂中浸泡5～9小时；（4）浸蜡、包埋与切片：取组织透明后的虫体，在65℃的液体石蜡中浸泡7～9小时，凝固定型后切片；（5）展片与粘片：取切片移至载玻片上，在切片边缘滴加60℃的蒸馏水至切片完全展开，再置于30～37℃条件下10～14小时粘片；（6）脱蜡和组织复水：取组织透明剂滴加在切片组织上，保持至少20分钟后吸走，重复至少3次，再依次滴加浓度梯度为100%、95%、85%、70%、50%、30%的乙醇溶液和水，每个梯度的处理时间为1～5分钟。