[发明专利]低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法，依次分离FⅠ、FⅡ+Ⅲ、FⅢ、FⅡ，在对FⅡ沉淀超滤、纯化时，依次采用超滤脱醇、巴氏灭活、一次沉淀分离、二次沉淀分离、二次沉淀超滤脱醇的工艺。本发明在过滤时将压滤机的温度控制在较低范围内，在沉淀分离工艺采用了适当的电导率，提高了免疫球蛋白的收率，在对免疫球蛋白纯化精制时，进行了两次沉淀分离，两次沉淀分离均采用了二级澄清除菌过滤，通过四级过滤技术，去除了制品中的不溶性颗粒，提高了制品的澄清度和收率。

主权项

一种低温乙醇提取静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、从人血浆中分离FⅠ，得FⅠ上清液；步骤二、从FⅠ上清液中分离出FⅡ+Ⅲ沉淀；步骤三、从FⅡ+Ⅲ沉淀中分离FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；步骤四、从FⅢ上清液中分离出FⅡ沉淀；步骤五、FⅡ沉淀超滤、纯化，包括以下步骤：①、超滤脱醇：取重量为上述FⅡ沉淀8～10倍、温度为2～8℃注射用水将FⅡ沉淀完全溶解，采用二级澄清除菌过滤，调节溶液pH值至4.30～4.70；②、巴氏灭活：将超滤脱醇后的溶液用注射用水调节蛋白质含量至17～33g/l，按60～120g/l加入甘氨酸，调节pH值至7.10～7.50，在55～65℃的温度下加温9～11小时进行巴氏灭活后，降温至20～30℃；③、一次沉淀分离：用注射用水调节巴氏灭活后的溶液，使溶液中蛋白质含量为5.0～15.0g/l，调节溶液pH值至6.70～7.20，控制温度至0～2℃，调节乙醇浓度至体积百分比18～20%，控制温度至2～6℃，调节溶液的电导率为1.20～1.50ms/cm，搅拌反应1～3小时，按每千克蛋白质0.08～0.12kg比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，继续反应0.5～1.5小时后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.9μｍ的深层滤板，控制压滤机温度至5℃以下，过滤分离出一次沉淀，得一次沉淀上清液；④、二次沉淀分离：将一次沉淀上清液温度控制至‑1～‑3℃，调节pH值至7.10～7.40，乙醇浓度至体积百分比24～26%，控制溶液温度至‑6～‑12℃，调节溶液的电导率为1.50～1.90ms/cm，搅拌反应1～3小时，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.9μｍ的深层滤板，控制压滤机温度至‑3℃以下，过滤分离出二次沉淀；⑤、二次沉淀超滤脱醇：取重量为上述二次沉淀5～10倍、温度为2～8℃的注射用水将二次沉淀完全溶解，采用二级澄清除菌过滤，同时调节pH值至3.40～3.80，超滤脱醇后再调节pH值至3.8～4.4。步骤六、将步骤五所得二次沉淀溶液按成品规格配制，使蛋白质含量不低于50g/l，加入麦芽糖，使麦芽糖含量为90～110g/l，加入聚山梨酯‑80，使聚山梨酯‑80含量不大于80μg/ml，调节pH值至3.8～4.4，实现制品配制后，进行除菌过滤分装。