[发明专利]一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法

摘要

一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取地枫皮种子作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；（3）将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；（4）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（5）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；（6）取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明所述的培养方法得到的地枫皮丛生芽增殖系数达到8-12倍，获得的组培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上，有效解决了地枫皮的规模化育苗问题。

主权项

一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：取地枫皮种子作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1%升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；（2）种子萌发获得无菌试管苗：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（3）试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2）中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含0.5‑3.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1‑1.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（4）丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养20天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1.0‑3.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.2‑1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（5）健壮植株生根培养：将步骤（4）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养35天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.1‑1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1‑0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.1‑0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（6）炼苗与移栽：步骤（5）获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2‑4天，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽大田。