[发明专利]一种烟草立枯病离体接种的人工发病方法

摘要

本发明公开了一种烟草立枯病离体接种的人工发病方法。该方法的步骤如下：1）接种用主要器具准备；2）烟苗培育；3）接种菌丝体的准备；4）离体叶片的采集；5）离体叶片的处置；6）接种病菌；7）接种后处置。本发明的优点是：1）所用器具简单，接种发病过程时间短，占用空间场地少；发病症状清晰易识别，重现性好。2）实施操作简易便捷；接种发病局部条件容易控制，容易实现技术方法的标准化。

主权项

一种烟草立枯病离体接种的人工发病方法，其特征在于，在倾斜的培养皿内将烟草离体叶片接种烟草立枯病菌，导致叶片组织坏死而表现出清晰的发病症状；操作步骤如下：1）接种用主要器具准备：用普通培养皿作接种用主要器具，清洁消毒后备用；2）烟苗培育：按常规方法培育烟苗，常规水肥管理，直至烟苗叶片长度与步骤1）的培养皿直径相近时，即可使用；3）接种菌丝体的准备：将立枯病菌移植到PSA普通真菌培养基平板中心，PSA培养基成分为：马铃薯200克，蔗糖20克，琼脂18克，水1000mL，28℃下培养至长出较大菌落，取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块，以此菌丝块作接种体；4）离体叶片的采集：用干净剪刀，剪取步骤2）烟草植株上的叶片长度与步骤1）的培养皿直径相近的叶片，用干净的容器装回室内，在自来水下轻轻冲洗干净叶片表面后待用；5）离体叶片的处置：将步骤1备好的培养皿倾斜放置，打开皿盖，取步骤4）准备的离体叶片一片展开放入培养皿内，叶片的顶端置于倾斜培养皿的高处，叶片的基端置于培养皿的最低处，并用一段干净灭菌的短玻璃棒将叶片的基端压住，然后取干净清水注入培养皿，清水浸没叶片基部；6）接种病菌：挑取步骤3）准备的菌丝块，轻轻贴放于步骤5）操作完备的叶片上，盖回培养皿盖；7）接种后处置：将步骤6）装载接种叶片的培养皿置于具备正常散射光的普通室内培养，培养温度维持在26～28℃；接种结果导致叶片出现非常清楚的叶片坏死症状，一般接种后30小时开始出现坏死症状，4～6天后整个叶片全部坏死。