[发明专利]应用液体冷媒诱导家蚕减数分裂型孤雌生殖的方法

摘要

本发明公开了应用液体冷媒诱导家蚕减数分裂型孤雌生殖的方法，属于昆虫遗传育种技术领域。方法包括：（1）未受精卵的收集和清洗；（2）液体冷媒的种类与配制；（3）未受精卵的冷激处理；（4）冷激蚕卵的保护和催青。本发明以液体冷媒为介导、以中国家蚕品系及中´日杂交种为材料，进行家蚕减数分裂孤雌生殖诱导试验取得了成功，获得了基因纯合型的雄蚕个体。这为中国家蚕获得新的纯合系和真杂种的遗传种质资源，并进一步开展基因表达、优异性状形成、杂种优势机理等的研究与利用提供了新的途径。

主权项

应用液体冷媒诱导家蚕减数分裂型孤雌生殖的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：（1）未受精卵的收集和清洗：摘取中系蚕品种或中´日杂交种，羽化后在室温下保持8～12小时的处女蛾的腹部，经室温自来水冲洗后，在14目塑料网纱上搓揉，剥离出未受精蚕卵并去除组织杂质，再用室温自来水冲洗至干净，室温晾干后，备用； （2）液体冷媒的种类与预处理：将乙醇和甘油分别与水按v/v比配制成20～50%的乙醇水溶液和甘油水溶液，另将氯化钠与水按w/v比配制成20～50%的氯化钠水溶液，并将上述三种液体冷媒预冷至‑11℃～‑14℃；另准备大口径容器烧杯或塑料杯并预冷至‑11℃～‑14℃后，备用；（3）未受精卵的冷激处理：将步骤（1）晾干后的未受精卵，装入40目的尼龙网纱小袋中封口后，放入步骤（2）大口径容器内并倒入上述三种液体冷媒中的任一种至没过网纱小袋后，置‑11℃～‑14℃条件下冷激处理30～120分钟，结束后捞出网纱小袋用室温自来水冲冼2～3分钟后，在室温下晾干； （4）冷激蚕卵的保护和催青：将冷激处理后的蚕卵放置在温度15～17℃，湿度75～85%的培养箱中96小时，取出后室温放置20～30分钟后，以46℃，比重为1.075的盐酸水溶液浸没5分钟，室温自来水冲洗2分钟，晾干；再在25℃、80%湿度条件下催青至孵化。