[发明专利]一种蟾蜍二烯内酯类化合物选择性分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种蟾蜍二烯内酯类化合物选择性分离纯化方法。基于低pH值条件下，氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类化合物和非氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类化合物的离子性质的不同，我们采用带正电荷的XCharge C18柱发展了一种新型的高选择性的高效液相色谱分离方法。流动相无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。选取蟾蜍皮95%乙醇提取物反相色谱制备分离所得的一个馏分，通过反相色谱制备获得两类共八个化合物。该方法可以实现氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类、非氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类的高效制备，特别是对氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类，该方法解决了拖尾问题，并表现出的较好的峰形和优异分离效果。从而提供了一种高效系统分离蟾蜍二烯内酯类化合物的新方法，为该类化合物的抗癌活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础和技术支撑。

主权项

一种蟾蜍二烯内酯类化合物选择性分离的纯化方法，其特征在于：1）蟾蜍皮乙醇提取物先经制备型RPLC分离，水（A）和甲醇（B）流动相体系；洗脱梯度为体积浓度25%→100%B（V/V）；按各色谱峰的保留时间分别收集各馏分，每个组分浓缩至干后备用；2）针对富含蟾蜍二烯内酯的组分F13，分离过程中F13组分对应的流动相中甲醇的体积浓度为57%‑58.3%，采用半制备反相色谱进行进纯化制备，色谱柱为XCharge C18柱；采用乙腈‑酸水溶液、甲醇‑酸水溶液或乙醇‑酸水溶液流动相体系，对F13进行选择性地分离和化合物制备。