[发明专利]一种获得中华大节竹SOS1逆向转运蛋白编码基因序列的方法

摘要

本发明公开了一种获得中华大节竹SOS1逆向转运蛋白编码基因序列的方法，包括以下步骤：提取中华大节竹幼苗的总RNA，反转录合成第1链cDNA。利用RACE方法设计特异引物IsSOS1-3′和IsSOS1-5′，分别进行3′RACE和5′RACE的扩增，通过巢式PCR分别获得3′和5′片段；用Vector NTI12软件拼接中间、3′和5′片段，获得了IsSOS1基因全长cDNA序列，设计特异引物IsSOS1-F2和IsSOS1-R2，通过PCR扩增，得到长度为3516bp的cDNA序列。本发明的SOS1逆向转运蛋白及其编码基因可以用来提高植物抗病性和抗盐性，可用于植物的遗传转化，提高植物的耐盐能力，使竹类植物能生长在滨海盐渍土地上，有利于竹类植物作为滨海防护林的种植，这种措施的经济效益是十分可观的，发挥了巨大作用。

主权项

一种获得中华大节竹SOS1逆向转运蛋白编码基因序列的方法，其特征在于，该获得中华大节竹SOS1逆向转运蛋白编码基因序列的方法包括以下步骤：步骤一，提取中华大节竹幼苗的根、茎和叶的总RNA，混合RNA后，反转录合成第1链cDNA；步骤二，用拟南芥和水稻等模式植物的SOS1基因序列，根据保守区域的序列设计简并引物IsSOS1‑F1和IsSOS1‑R1，以反转录合成第1链cDNA为模板，进行PCR扩增；步骤三，PCR加样总体系为50μL：cDNA模板为1.0μL，上和下游引物10μmol/L分别为1μL，10×Buffer Mg2⁺为5μL，dNTPs Mixture10mmol/L为4μL，ExTaq DNA聚合酶5U/μL为0.5μL，最后补37.5μL的灭菌水；通过PCR的扩增，获得了700bp的中间片段；步骤四，利用SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒中已知的引物，根据中间片段设计特异引物IsSOS1‑3′和IsSOS1‑5′，分别进行3′RACE和5′RACE的扩增，通过巢式PCR分别获得3′和5′片段；步骤五，用Vector NTI12软件拼接中间、3′和5′片段，拼接出IsSOS1基因全长cDNA序列，根据拼接出的全长序列，设计特异引物IsSOS1‑F2和IsSOS1‑R2通过PCR扩增，PCR扩增后获得含有IsSOS1基因全长编码框的cDNA序列。