[发明专利]一种检测饮用水中卫生质量和GMP工厂表面卫生的ATP生物发光试剂、方法及试剂盒

摘要

本发明公开一种检测饮用水中卫生质量和GMP工厂表面卫生的ATP生物发光试剂、方法及试剂盒。本发明所述的ATP生物发光试剂，包括荧光素酶、D-荧光素、去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统，所述的荧光素酶必须经过纯化，纯化的荧光素酶的活力本底比达到50～3000，其使得ATP生物发光试剂的发光比活力在0.4mL发光体系中，用1×10^-7/L ATP测量时的相对发光对数值达到6.5～7.5，将荧光素酶、D-荧光素、去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统混合后冷冻得到冻干粉。本发明采用高灵敏度稳定发光的ATP生物发光试剂对饮用水卫生质量及GMP工厂表面卫生进行快速检测，在半小时内可以完成取样与快速检测。

主权项

一种检测饮用水中卫生质量和GMP工厂表面卫生的ATP生物发光试剂，其特征在于，包括荧光素酶、D‑荧光素、去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统，所述的荧光素酶必须经过纯化，具体制备方法为：取天然萤火虫虫尾，通过添加酶提取液研磨、离心和硫酸铵沉淀得到粗酶制剂；再通过复溶、透析、超滤、离心和阳离子交换法进行纯化，纯化过程中的NTE缓冲液是经过去ATP处理的，进一步经一次分子排阻层析或亲和层析和二次分子排阻层析，即得到纯化的荧光素酶，其使得ATP生物发光试剂的发光比活力在0.4mL发光体系中，用1×10^‑7mol/L ATP测量时的相对发光对数值达到6.5～7.5；所述的D‑荧光素的纯度为99%以上，其在ATP生物发光试剂中的终浓度为20～150μg/mL；所述的去ATP无菌处理的发光稳定缓冲系统含10～100mg/L海藻糖、5～100mg/L PEG、0～2.0mol/L蔗糖、0.1～2.0mol/L甘氨酸、0～2.0mol/L DMSO、0～1mmol/L焦磷酸、25mmol/L甘氨酰甘氨酸、1.0mmol/L EDTA、1.0mmol/L DTT,pH7.2～7.8。