[发明专利]一种拓宽基因工程酶pH作用范围的方法在审
| 申请号： | 201410015978.5 | 申请日： | 2014-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN104774864A | 公开（公告）日： | 2015-07-15 |
| 发明（设计）人： | 邹立扣;龙梅;王红宁;陈惠;吴琦;李蓓;吴国艳;郭莉娟 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611830 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 一种拓宽基因工程酶pH作用范围的方法。从GenBank中下载不同pH值作用范围的酶基因A及酶基因B，并进行优化设计，获得在酵母中表达的优化基因。将优化酶基因A的上游5’及下游3’端分别插入XbaI/NdeI/KasI/SnaBI等酶切位点，将酶基因B的上游5’及下游3’端分别插入NsiI/NspI/KpnI/NotI等酶切位点后，分别构建酶基因A、B的克隆载体pUCm-A和pUCm-B。经酶切及测序后构建了融合表达中间载体pPIC9KpP-B，再经酶切及测序后构建融合表达载体pPIC9KpP-AB。将重组质粒线性化后，电击转化酵母宿主细胞。经MD和MM平板筛选及酶活性测定，获得融合酵母阳性菌株。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 拓宽 基因工程 ph 作用 范围 方法 | ||
【主权项】：
一种拓宽基因工程酶pH作用范围的方法，该方法主要包括筛选不同pH作用范围值的酶基因，酶基因的优化设计确定，酶基因克隆载体、融合表达中间载体的构建，以及融合表达载体在酵母中的电击转化，酵母阳性菌株的筛选，酶活性检测。
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