[发明专利]脂质体保护的纳米金基因载体及其制备方法

摘要

本发明提供一种脂质体保护的纳米金基因载体的制备方法为将二‑十八烷基二甲基溴化铵与二油酰磷脂酰乙醇胺溶解于有机溶剂，然后除去所述有机溶剂后溶于水，超声得到磷脂泡囊溶液；所述二‑十八烷基二甲基溴化铵与二油酰磷脂酰乙醇胺的摩尔比为110～101；将所述磷脂泡囊溶液与含有金离子的化合物混合后，加入还原剂，反应得到脂质体保护的纳米金基因载体。本发明脂质体保护的纳米金基因载体与基因复合后，转染效率高，在特定环境中基因释放速度快；在血清中稳定性好，无聚集现象，在体外转染过程中无需将培养液中的血清去除，简化了转染过程；对DNA的担载量较高，降低了DNA使用数量，降低外源DNA对细胞毒性和对机体的免疫原性。

主权项

一种脂质体保护的纳米金基因载体，包括：二‑十八烷基二甲基溴化铵、二油酰磷脂酰乙醇胺和纳米金颗粒；所述二‑十八烷基二甲基溴化铵和二油酰磷脂酰乙醇胺包裹在纳米金颗粒外部；所述纳米金基因载体由以下步骤制备得到：将0.0032g DODAB和0.0111g DOPE溶解到10mL氯仿中，用氮气流去除大部分氯仿后，真空干燥2小时，去除痕量氯仿；加入20mL水溶液后，超声处理至澄清，制备得到DODAB/DOPE泡囊溶液；然后向所述DODAB/DOPE泡囊溶液中加入20微升0.1M氯金酸溶液搅拌混合；混匀后加入24微升0.4M硼氢化钠溶液；搅拌反应1小时后得到DODAB/DOPE保护的金纳米颗粒；所述纳米金基因载体配制为纳米金浓度为2nmol/L的溶液，将所述溶液加入含有HEK 293细胞的新鲜培养基中，并置于培养箱内，在CO2体积分数为5％的条件下培养，所述培养的温度为37℃，培养的时间为24h，然后，加入10μL质量浓度为5mg/mL的MTT试剂，继续培养4h，然后吸出培养基，加入100μLDMSO，室温避光轻摇15min，使紫色结晶充分溶出，最后，利用酶标仪测定490nm处的吸光值，从而得出相对细胞存活率。