[发明专利]一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法无效
| 申请号： | 201410030498.6 | 申请日： | 2014-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN103773787A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 周宇芳;朱鹏;相兴伟;杨会成;肖金星;徐珊 | 申请（专利权）人： | 浙江省海洋开发研究院;宁波大学 |
| 主分类号： | C12N15/57 | 分类号： | C12N15/57;C12N15/70;C12N9/52 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 袁忠卫 |
| 地址： | 316021 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法，以交替假单胞菌MB004基因组DNA为模板，用PCR方法克隆MB004的编码基因，将该基因重组到表达质粒中，获得重组质粒，将重组质粒线性化，以原生质体转化的方法整合到大肠杆菌感受态细胞中，获得整合了质粒的重组表达菌株，接种培养基中培养诱导表达重组蛋白，表达的蛋白经离心后收集，浓缩，经IPTG诱导表达、亲和层析纯化获得重组蛋白纯化产物。本发明从海洋细菌中筛选出能产生胶原蛋白酶的细菌MB004，从而获得其胶原蛋白酶基因，胶原蛋白酶PNJC的酶活力为160.34U/mg，达到胶原蛋白酶标准品的70.48%。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 海洋 细菌 交替 假单胞菌 mb004 胶原 蛋白酶 基因 克隆 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法，是以交替假单胞菌MB004基因组DNA为模板，该交替假单胞菌MB004的核苷酸序列如<400>1所述，用PCR方法克隆MB004的编码基因，将该基因重组到表达质粒pET28a中，获得重组质粒pET28a‑Pnjc，将重组质粒线性化，以原生质体转化的方法整合到大肠杆菌Rosseta感受态细胞中，获得整合了质粒的重组表达菌株Rosseta(DE3)/pET28a‑Pnjc，接种到LB培养基中培养诱导表达重组蛋白，重组蛋白以可溶性的形式分泌到培养液中，表达的蛋白经离心后收集，浓缩，经IPTG诱导表达、亲和层析纯化获得重组蛋白纯化产物。
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