[发明专利]一种检测DNA中的5-甲基胞嘧啶的方法

摘要

本发明涉及一种检测DNA中5-甲基胞嘧啶方法，该方法以不对称PCR原理为基础运用含荧光基团的（脱氧鸟苷三磷酸）dGTP来检测DNA中的5甲基胞嘧啶。具体检测步骤如下：先用亚硫酸氢钠法处理含5甲基胞嘧啶的DNA，将DNA中的胞嘧啶转化为尿嘧啶，再通过不对称PCR可以得到大量目标DNA的互补链，这样与DNA中的胞嘧啶互补的是不带荧光的腺嘌呤，而与5甲基基胞嘧啶互补的是带荧光的dGTP。再通过DNA凝胶电泳（PAGE）可以检测DNA中的5-甲基胞嘧啶。此后在492nm处激发可以对DNA中的5-甲基胞嘧啶进行荧光检测。

主权项

一种检测DNA中的5‑甲基胞嘧啶的方法，其特征在于，包括如下步骤：设计待测DNA的引物，引物不包含CpG岛；将DNA进行亚硫酸氢钠处理，将不含甲基的胞嘧啶转化成为尿嘧啶；进行不对称PCR，限制性引物和非限制性引物的比例为1:100，四种dNTP的终浓度为100 µM，Fluorescein‑dGTP占总dGTP的75%；定性检测：将PCR产物用pore除盐柱除去未反应的Fluorescein‑dGTP，用 超纯水溶解纯化后的PCR产物，以492 nm 波长激发，扫荧光光谱，若发现荧光，则目标DNA中含有5甲基胞嘧啶；定量检测：将PCR产物进行12%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据相应电泳条带的荧光强度来定量分析5甲基胞嘧啶的含量。