[发明专利]基于AllGlo探针荧光定量PCR的microRNA检测试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 201410041348.5 | 申请日： | 2014-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN103757126A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 张忠英;唐晶 | 申请（专利权）人： | 厦门大学附属中山医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12M1/34;C12N15/11 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 马应森 |
| 地址： | 361004 福建省厦*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 基于AllGlo探针荧光定量PCR的microRNA检测试剂盒及其检测方法，涉及microRNA。试剂盒设有盒体、隔板、miRNA提取试剂瓶、茎环逆转录试剂瓶、实时荧光定量PCR试剂瓶。提取样本中miRNA，若为血清/血浆或其他体液样本，在200μL样本裂解后加入试剂盒提供的浓度为5n mol的外源性参照cel-miR-39 5μL，漩涡震荡15s；若为细胞或组织样本，则无需加入外源性参照cel-miR-39；应用试剂盒提供的茎环逆转录试剂将miRNA逆转录为cDNA；应用试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将cDNA进行实时荧光定量PCR扩增；综合各项数据，设定合理阈值和基线，进行分析。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 allglo 探针 荧光 定量 pcr microrna 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
【主权项】：
检测miRNA的特异引物，其特征在于包括特异的逆转录引物和特异的正向引物；所述特异的逆转录引物是指在核苷酸序列为SEQ ID NO.1 5＇‑GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAC5＇‑末端加上与miRNA序列3＇端8个反向互补的碱基；所述特异的正向引物是指在miRNA的碱基序列去掉3＇端8个碱基，同时在5＇端加上6个碱基序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2 5＇‑TCCCTC‑3＇。
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