[发明专利]一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器

摘要

一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，它涉及DNA的电化学检测。本发明是要解决现有电化学传感器难以实现对四种DNA碱基的同时灵敏分析和稳定检测，现有方法存在的易受样品污染，仪器复杂昂贵，操作繁琐问题，以及电位窗较窄，对嘧啶碱基响应电流较低，稳定性较差问题。本发明步骤如下：一、制备氧化石墨烯及溴甲酚紫溶液；二、制备石墨烯修饰电极；三、制备溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极；四：使用复合修饰电极检测四种碱基混合液的电化学信号，分析并确定其电化学信号所在的峰位；步骤五：对碱基混合液进行电化学检测，得到其随浓度变化的差分脉冲伏安图；建立四种DNA碱基电化学信号变化规律图。本发明适用于电化学传感器领域。

主权项

一种用于DNA碱基同时检测的电化学传感器，其特征在于它是按以下步骤进行：步骤一：将利用Hummer方法制备的氧化石墨烯粉末，于双蒸水中超声分散10～15min，得到浓度为0.2～0.5mg/mL的氧化石墨烯悬浊液；将溴甲酚紫于浓度为0.01M的NaNO₃溶液中分散，得到浓度为1.0×10^‑3～2.0×10^‑3M的溴甲酚紫溶液；步骤二：取5～10μL步骤一得到的氧化石墨烯悬浊液，滴涂到玻碳电极表面，置于红外灯下干燥，干燥后冷却至室温，得到氧化石墨烯修饰的玻碳电极；将氧化石墨烯修饰的玻碳电极置于pH=5～7的PBS溶液中进行恒电位还原，还原电位为‑1.0～‑1.5V，还原时间为360～720s，即得石墨烯修饰电极，室温晾干待用；步骤三：将步骤二中制得的石墨烯修饰电极置于步骤一得到的溴甲酚紫溶液中进行循环伏安扫描，其中，电位为‑1.0～+1.5V，扫描速率为50～100mVs^‑1，循环次数为10～15圈，即得溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极；步骤四：用步骤三制备的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测四种碱基混合溶液的电化学信号，确定四种碱基电化学信号所在的峰位；其中，所述的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测的工作条件如下：温度为22～25℃、脉冲高度为0.01～0.1V，脉冲宽度为0.01～0.1s，电位增量为0.005～0.015V；所述的四种碱基混合溶液由浓度为0.20～200.0μM的鸟嘌呤、浓度为0.20～220.0μM的腺嘌呤、浓度为2.0～700.0μM的胸腺嘧啶、浓度为2.50～650.0μM的胞嘧啶和pH=7.0～7.4、浓度为0.1～0.2M的PBS缓冲液制成；步骤五：对待测的四种碱基混合液采用进行步骤三制备的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极进行电化学检测，得到鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶随浓度变化的差分脉冲伏安图；然后分别以碱基浓度为横坐标，以电化学检测的电流信号为纵坐标，建立四种DNA碱基电化学信号变化规律图；其中，所述的溴甲酚紫/石墨烯复合修饰电极检测的工作条件如下：温度为22～25℃、脉冲高度为0.01～0.1V，脉冲宽度为0.01～0.1s，电位增量为0.005～0.015V；所述的待测定的四种碱基混合溶液由浓度为0.20～200.0μM的鸟嘌呤、浓度为0.20～220.0μM的腺嘌呤、浓度为2.0～700.0μM的胸腺嘧啶、浓度为2.50～650.0μM的胞嘧啶和pH=7.0～7.4、浓度为0.1～0.2M的PBS缓冲液制成。