[发明专利]蛹虫草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

摘要

本发明提供一种蛹虫草抗肿瘤活性组分的提取方法：蛹虫草子实体超低温粉碎；得到超微粉水煮提取，沉淀再丙酮提取；得到沉淀溶解后过液相色谱，洗脱试剂依次为100%正己烷、25%乙酸乙酯-正己烷、100%乙酸乙酯；选取抗肿瘤活性最强组分过液相色谱，洗脱试剂依次为100%正己烷、10%乙酸乙酯-正己烷、15%乙酸乙酯-正己烷；选取抗肿瘤活性最强组分再过液相色谱，洗脱试剂为100%二氯甲烷，选取抗肿瘤活性最强组分即为本发明目的组分。该方法重复性好，得到的抗肿瘤活性组分可用于制备抗肿瘤药物中。

主权项

一种蛹虫草抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）超低温粉碎：取烘干的蛹虫草子实体为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，同时粉碎全过程用2～10℃的水作为超微破碎机内部冷却液，超微粉碎时间为5‑20min，得到超微粉；（2）溶剂提取：水煮：在超微粉中加入超纯水，超纯水的加入量为超微粉质量的8～10倍，100℃加热3～10小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，将得到的沉淀合并，干燥，得到粗品A；丙酮沉淀：在粗品A中加入丙酮，丙酮的加入量为粗品A质量的2～4倍，室温下浸提12～36小时，离心后取沉淀，然后重复1～3次，将得到的沉淀合并，干燥，得到粗品B；（3）色谱分离：取粗品B用50%乙酸乙酯‑正己烷溶液溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%正己烷等度洗脱10min，25%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱25min，100%乙酸乙酯等度洗脱15min，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，得到组分A；取组分A用100%乙酸乙酯50度超声至刚好溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%正己烷等度洗脱10min，10%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱50min，15%乙酸乙酯‑正己烷溶液等度洗脱20min，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分旋蒸浓缩后真空干燥，得到组分B；取组分B用100%二氯甲烷50度超声至刚好溶解至浓度为50mg/ml，然后通过制备液相色谱进行分离，洗脱方式为100%二氯甲烷等度洗脱40min，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性最强的组分，旋蒸浓缩后真空干燥，即为本发明目的抗肿瘤活性组分。