[发明专利]一种二化螟幼虫脂肪体细胞系的构建方法

摘要

本发明公开了一种二化螟幼虫脂肪体细胞系的构建方法。它包括如下步骤：（1）配制细胞原代培养液和传代培养液；（2）将二化螟幼虫浸没在乙醇溶液中，进行表面消毒，清洗吸干；（3）将虫体置于用乙醇消毒过的解剖蜡盘中，解剖二化螟；（4）将脂肪体组织块放入盛有HBSS清洗液的细胞培养瓶，静置，待脂肪体细胞贴壁后，吸除HBSS，加入新鲜的HBSS，重复3次；（5）加入细胞原代培养液，放入无光照的细胞培养箱中培养，过夜后，再加入细胞传代培养液；（6）每隔7天吸出和换入细胞传代培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。本发明有助于在离体条件下研究二化螟，为其防治途径的研究和开发提供帮助。

主权项

一种二化螟幼虫脂肪体细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）配制细胞原代培养液和细胞传代培养液；（2）在无菌条件下，将二化螟幼虫浸没在70%或75%乙醇溶液中，进行表面消毒10～20分钟，用无菌蒸馏水清洗二化螟幼虫2～3次，用无菌滤纸吸干虫体或用吹风机吹干虫体；（3）将虫体置于用70%或75%乙醇消毒过的解剖蜡盘中，用解剖针将头尾固定，用消毒解剖剪从背部剪开二化螟，操作时尽量保持其完整，注意不能触破昆虫的消化道等同体外直接相连的部分；用消毒过的尖头镊取出脂肪体；（4）将脂肪体放入盛有HBSS清洗液的培养皿中，用HBSS清洗脂肪体2‑3次，然后再用细胞培养液TNM‑FH清洗脂肪体1次，HBSS清洗液含200U/ml的青霉素， 0.2μg /ml的链霉素, 0.5μg /ml的两性霉素B；（5）将清洗过的脂肪体置于预先盛有1ml细胞原代培养液的T‑25cm²细胞培养瓶中，放入27℃无光照的细胞培养箱中培养；（6）过夜后，待组织或器官贴壁后，再加入2ml细胞传代培养液，使脂肪体大部分浸没在该传代培养液中，在与步骤（5）同样条件下培养，在加液的时候勿使组织悬浮在细胞传代培养液中；（7）每隔10天吸出50%～70%量的细胞传代培养液，并同时换入吸出量的新的细胞传代培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。