[发明专利]一种利用野生稻资源创制粳型水稻新种质的育种方法

摘要

本发明属于水稻遗传改良与生物技术应用，具体涉及一种利用野生稻资源创制粳型水稻新种质的育种方法。其方法包括如下步骤：S1.野生稻基因组DNA的提取；S2.DNA导入；S3.筛选性状具有变异的植株；S4.对筛选的变异植株进行分子鉴定。本发明提供了一种切实可行的创新水稻种质的途径，将野生稻DNA导入粳型水稻，获得具有野生稻性状的导入后代材料，其导入效率高达6.8%、变异广泛，选择群体大，缩短育种年限，适合育种需要，且稳定快，导入的第3代就稳定了，创制的新种质可以作为粳稻育种的亲本材料利用或经定向选育后成为新品种应用于水稻生产。

主权项

一种利用野生稻资源创制粳型水稻新种质的育种方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.野生稻基因组DNA的提取 （a）剪取孕穗期的叶片5g放入50ml研钵； （b）向步骤（a）的研钵中加入液氮，每次加入50ml，总共3次到4次，快速研磨成细粉，将细粉倒入50ml塑料离心管； （c）向步骤（b）的离心管中加入预热提取缓冲液25ml及β–巯基乙醇25μL，混匀后65℃水浴30min； （d）向步骤（c）的离心管中加5mol/L醋酸钾溶液5ml,温和混匀，冰浴20min； （e）向步骤（d）的离心管中加入等体积氯仿和异戊醇混合液，氯仿与异戊醇的体积比为24：1，在4℃4500×g离心15min； （f）吸出步骤（e）中的上清液，加等体积‑20℃预冷的异丙醇，静止3min‑5min至出现白色DNA线团； （g）挑起步骤（f）中DNA线团，70%乙醇洗涤，晾干，溶于0.1ml 1×SSC，4℃保存； S2.DNA导入 在孕穗后期，花粉发育到单核中晚期，外部形态表现为穗顶部离剑叶叶枕2cm，利用微量注射器将DNA导入水稻穗颈节，从上向下呈45度角刺入穗下颈节处，注入DNA液，DNA浓度为400μg/ml，缓冲液为添加了2mg/ml CaCl₂的0.1×SSC缓冲液，注射时间为上午9点至上午10点，每株导入10μl，重复导入3次；待导入株成熟后分别收获导入穗和对照穗，下年种植选择变异株； S3.筛选性状具有变异的植株 将收获的导入穗按穗及对照穗进行无土育秧，当秧苗长至10cm左右，分别按穗行单株植入田间，以受体材料作为对照筛选性状具有变异的植株，并将变异 株继续种植，直到后代性状稳定； S4.对筛选的变异植株进行分子鉴定 将筛选的具有变异性状的植株利用SSR分子标记进行分子鉴定，以供、受体为对照，鉴定变异植株中有无供体野生稻的DNA片段进入。