[发明专利]一种基于植物cDNA文库的基因全长cDNA的批量分离方法

摘要

本发明公开了一种从生物中批量分离基因全长cDNA的方法。该方法包括如下步骤：1）提取生物总RNA；2）将总RNA反转录得到双链cDNA，将所述双链cDNA与文库载体连接，连接产物转化受体菌，得到全长cDNA文库；3）将cDNA文库的菌液涂在向培养基中添加抗生素后得到的平板上进行培养，获得单菌落；4）批量挑取单菌落，分别进行培养，提取质粒后用测序引物进行测序，从每个单菌落中获得所述生物的一个基因的全长cDNA序列。实验证明，本发明所提供的从生物中批量分离基因全长cDNA的方法，减少了传统方法通过EST序列进行RACE的成本，可快速分离到大量未知基因组物种的基因全长cDNA序列。本发明对反向遗传学研究中筛选基因及其功能研究具有较大的实际应用价值。

主权项

一种从生物中批量分离基因全长cDNA的方法，包括如下步骤：（1）从生物的组织中提取总RNA；（2）将步骤（1）获得的总RNA反转录得到双链cDNA，将所述双链cDNA与文库载体连接，得到重组载体，将所述重组载体转化受体菌，得到全长cDNA文库；（3）将步骤（2）获得的全长cDNA文库的菌液涂在向培养基中添加抗生素后得到的平板上进行培养，获得单菌落；（4）批量挑取步骤（3）中的单菌落，将每个单菌落分别进行培养，提取质粒后用测序引物进行测序，从每个单菌落中获得所述生物的一个基因的全长cDNA序列；所述测序引物为位于所述重组载体中所述双链cDNA上游的序列，和/或位于所述重组载体中所述双链cDNA下游的序列的反向互补序列。