[发明专利]东北自然发酵酸菜中细菌多样性的DGGE分析方法无效
| 申请号： | 201410059200.4 | 申请日： | 2014-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN103952468A | 公开（公告）日： | 2014-07-30 |
| 发明（设计）人： | 乌日娜;武俊瑞;于美玲;岳喜庆 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 沈阳科威专利代理有限责任公司 21101 | 代理人： | 张述学 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 一种东北自然发酵酸菜中细菌多样性的DGGE分析方法，主要解决传统方法不能全面、准确的反映酸菜内的种群结构、细菌多样性的问题，方法：1、酸菜样品的预处理；2、提取酸菜样品中微生物的总DNA；3、以提取的微生物的总DNA为模板，进行16SrRNA的PCR扩增；4、将PCR产物在进行DGGE电泳分析，电泳结束后染色、扫描仪成像，在PCR-DGGE图谱上标记特异性条带，切胶回收，最后在NCBI数据库进行Blast比对，获得微生物信息。即完成东北自然发酵酸菜中细菌多样性的DGGE分析方法，用于分析酸菜内细菌的多样性。 | ||
| 搜索关键词： | 东北 自然 发酵 酸菜 细菌 多样性 dgge 分析 方法 | ||
【主权项】：
一种东北自然发酵酸菜中细菌多样性的DGGE分析方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：（1）、选择酸菜样品，对样品进行预处理及菌体收集；（2）、采用FastPrep结合CTAB法进行酸菜样品中微生物总DNA的快速提取；（3）、以提取的微生物的总DNA为模板，采用16S rRNA基因V3区具有特异性的引物对.进行细菌16S rRNA的PCR扩增，将PCR反应的产物用琼脂糖凝胶电泳检测；（4）、将PCR产物进行DGGE电泳分析；（5）、电泳结束后对DGGE产物进行染色、扫描仪成像，得到DGGE 图谱，在酸菜样品细菌DGGE 图谱上标记特异性条带，切胶回收；（6）、回收的DNA条带需重新进行PCR扩增，然后对产物进行测序，将测得的序列结果在NCBI数据库进行Blast同源性对比分析，确定细菌的归属，即完成东北自然发酵酸菜中细菌多样性的DGGE分析方法。
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