[发明专利]一种改进的海马神经元原代培养方法

摘要

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种神经元分离和培养方法及试剂。本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，改进当前海马神经元体外分离和培养的方法，解决了海马神经元原代培养的增殖性和活性无法保持的问题。本发明建立了一套比较成熟的体外培养海马神经元的方法，本发明得到的神经细胞数量充足，生长状态较好，能够从哺乳动物的海马组织中分离出高活性、高数量的海马神经细胞，符合原代海马细胞培养的要求，可满足神经科学研究中细胞生物学实验的需求。

主权项

一种海马神经元的分离和原代培养方法包括以下步骤： (1)漂洗：取离体哺乳动物的海马组织，置冰浴的漂洗液中，去除红细胞、被膜及结缔组织，用漂洗液冲洗2～5次； (2)消化：将步骤1漂洗后的海马组织剪成直径1mm³小块，用5倍组织体积的消化液37℃作用5～10分钟，组织成粥糜状，用细胞种植液终止消化，轻轻吹打至组织块10次以分散细胞。 (3)制备细胞悬液：收集步骤2消化后初次细胞悬液，经200目细胞筛过滤后，800～1000rpm4℃离心5～10分钟，弃去上清液，加入细胞种植液，重悬细胞，制成5×10⁵～10×10⁵个/mL的单细胞悬液； (4)接种、培养：将步骤3细胞悬液种植于预先铺好多聚赖氨酸的培养皿及培养瓶中，置于37℃、5％CO₂恒温培养箱中，种植后24～72小时换成细胞维持液，之后每隔两天用细胞维持液换液，每次更换的量为原体积的1/2。