[发明专利]快速检测抗精恶唑禾草灵菵草的Ile-1781-Leu突变的分子检测方法

摘要

本发明公开了一种基于LAMP技术快速鉴定含有Ile-1781-Leu突变的抗精恶唑禾草灵的菵草基因型的分子检测方法，可用于含有该种突变的菵草的早期预警和流行监测。该检测方法共分3个主要步骤，(1)分别提取待测样品的基因组DNA；(2)设计特异性引物，进行LAMP恒温扩增；(3)在上述LAMP扩增产物中加入荧光染料SYBR Green I，观察其颜色变化；也可在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果。根据结果鉴定是否为具有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果LAMP扩增产物显示黄色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果扩增产物为橙色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为不带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群。本发明实现了恒温扩增，不需要昂贵的仪器设备、繁琐的电泳过程，使检测时间和成本大大降低。与普通PCR相比，本发明还具有灵敏度高、特异性强、检测准确性高等特点。

主权项

1.一种快速检测抗精恶唑禾草灵菵草、日本看麦娘、看麦娘等抗性杂草的Ile-1781-Leu突变的分子检测方法，其特征在于基于环介导恒温扩增技术(LAMP)对该突变进行快速鉴定，该方法共分三步： (1)运用引物的特异性进行LAMP恒温扩增，环介导恒温扩增技术(LAMP)反应体系及参数： 反应体系： 反应参数：65℃60min，80℃10min； (2)在上述LAMP扩增产物中加入荧光染料SYBR Green I，观察其颜色变化；也可在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果； (3)鉴定是否为具有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果LAMP扩增产物显示黄色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果扩增产物为橙色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为不带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群。