[发明专利]一种含有MALAT1基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒及其应用

摘要

本发明涉及一种含有MALAT1基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒及其应用。具体地，根据生物信息学数据库预测has‑mir‑619‑5p与MALAT1基因3’UTR区结合的位点，将其中包含该结合位点的序列扩增出来，插入双荧光素酶报告基因质粒pmirGLO vector，成功构建了MALAT1基因3’UTR区双荧光素酶报告基因质粒。该质粒可作为简单易行的工具，用于检测调控MALAT1表达的microRNA的表达量、筛选调控MALAT1表达的microRNA，以及评估microRNA对MALAT1表达的调控作用，为通过检测microRNA表达情况了解肿瘤的发生发展提供了重要手段。

主权项

1.一种含有MALAT1基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)获取序列如SEQ ID NO.2所示的has‑mir‑619‑5p与MALAT1基因结合的靶点，确定所要克隆的目的片段；b)设计序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物，以人基因组为模板克隆获得SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列并测序验证；c)将步骤b)得到的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列连接到pmirGLO vector的Pme I和XbaI酶切位点之间。