[发明专利]一种重组家蚕素的表达方法及其抗肿瘤应用

摘要

本发明公开了属于基因工程技术领域的一种重组家蚕素的表达方法及其抗肿瘤应用。方法如下根据表达系统对目的基因进行密码子偏好优化；利用全基因合成技术合成优化后的家蚕素基因；将该基因连接到表达载体，构建成重组表达载体；将重组表达载体转化到相应的表达系统；通过进一步的培养、筛选、鉴定，获得含重组表达载体菌株，并诱导表达出目的蛋白，本发明表达重组家蚕素II或重组家蚕素IV及两者的混合物具有广泛的抗肿瘤活性，无生物毒性，可以用于制备抗肿瘤药物。

主权项

一种重组家蚕素的表达方法，其特征在于，表达方法包括以下步骤：(1)优化家蚕素基因：根据表达系统对删除信号肽序列的家蚕素基因进行密码子偏好优化，添加酶切位点和纯化标签，人工合成基因片段；(2)构建重组克隆载体：将步骤(1)中的人工合成基因片段与克隆载体连接，转化到大肠杆菌中，挑选阳性克隆；(3)构建重组表达载体：将表达载体和步骤(2)重组克隆载体分别酶切，纯化，回收目的基因片段和线性化表达载体，连接目的基因片段和线性化表达载体，构建重组表达载体，将重组表达载体转化到酵母菌中，经筛选得到酵母菌转化子；(4)表达重组家蚕素：对步骤(3)所筛选的转化子进行培养、诱导、分离、纯化，得到重组的家蚕素；步骤(1)中所述家蚕素基因为bbxA6，优化后的家蚕素基因bbxA6的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；步骤(3)中所述的酵母菌为毕赤酵母菌GS115；步骤(4)所述的重组家蚕素为家蚕素II。