[发明专利]一种胃液中lncRNA的提取与检测方法有效
| 申请号： | 201410088376.2 | 申请日： | 2014-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN103834738A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 郭俊明;邵永富;肖丙秀 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 徐雪波 |
| 地址： | 315211 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种胃液中lncRNA的提取与检测方法，包括胃液抽取、胃液预处理、三氯甲烷提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、干燥RNA、RNA逆转录、PCR检测等步骤，与现有技术相比，本发明的优点在于：通过对胃液预处理、氯仿提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、RNA逆转录和PCR检测步骤，去除了胃液中多糖、粘蛋白等杂质，在简化实验操作步骤的基础上实现了对胃液中lncRNA高质量、高产率的提取，实现了对目标lncRNA荧光定量RT-PCR检测，通过对130例胃液样本GAPDH的Ct值分析，发现了GAPDH是胃液中一个良好的外参基因，在此基础上又提出了用于判断胃液总RNA质量的GAPDH参考Ct值范围，对进一步研究胃液中lncRNA的出现规律及其与生理状态和疾病发生的关系具有重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 胃液 lncrna 提取 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种胃液中lncRNA的提取与检测方法，包括如下步骤：(1)采用RNA抽提试剂提取人胃液总RNA，用逆转录试剂对RNA提取液进行逆转录反应得到cDNA；(2)对步骤(1)的cDNA溶液进行PCR扩增反应，再用荧光定量PCR仪检测扩增；其特征在于：步骤(1)中采用抽提剂Trizol LS对胃液进行RNA的提取，并且在步骤(2)中通过lncRNA特异性扩增上下游引物或GAPDH扩增上下游引物对cDNA溶液进行PCR扩增反应。
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