[发明专利]一种筛选福建红曲醋中专用醋酸菌菌株的方法

摘要

一种筛选福建红曲醋中专用醋酸菌菌株的方法，涉及食醋。以红曲酒为碳源富集福建红曲醋专用醋酸菌；初筛福建红曲醋专用醋酸菌菌株；复筛福建红曲醋专用醋酸菌菌株，比较不同初筛菌株的产酸能力，能在高于4%乙醇的培养基中快速产酸的菌株即为福建红曲醋中专用醋酸菌菌株。所述菌株为Y5052和Y5072。经鉴定，Y5052和Y5072均为木糖葡糖酸醋杆菌。采用两个关键技术。一是采用添加红曲酒富集醋母中目标菌株，二是采用高浓度乙醇培养基平板，使醋酸菌菌株可以在平板上形成水解透明圈，增加筛选的成功率。采用的在醋母中添加红曲酒的富集方法和在平板中添加高浓度乙醇的筛选方法，可简化筛选过程，提高筛选效率。

主权项

一种筛选福建红曲醋中专用醋酸菌菌株的方法，其特征在于包括以下步骤：1）以红曲酒为碳源富集福建红曲醋专用醋酸菌：将糯米加第一次水浸泡，淘洗，沥干，蒸汽加热，摊凉后装入坛中，加入红曲和第二次水，搅匀后扎坛口，控制温度低于34℃，维持40～45天，中间搅拌4～5次，即制得红曲酒酒酿；再经过滤，加热后，即制得红曲酒；在红曲酒中加入红曲醋醋母，保持温度低于34℃，时间5～35天，即制得富集福建红曲醋专用醋酸菌菌株的富集培养物；2）初筛福建红曲醋专用醋酸菌菌株：先制备醋酸菌选择性培养基，再制备醋酸菌选择性培养基平板；稀释步骤1）制得的富集福建红曲醋专用醋酸菌菌株的富集培养物，稀释的浓度依次为：10^‑1、10^‑2…、…至10^‑8，分别取各浓度稀释液100μL涂在醋酸菌选择性培养基平板上，倒置培养，挑选醋酸菌选择性培养基平板上周围出现的透明水解圈的菌落，在醋酸菌选择性培养基平板上划线纯化，然后接种于醋酸菌选择性培养基斜面上，即得到初筛的福建红曲醋专用醋酸菌菌株；3）复筛福建红曲醋专用醋酸菌菌株：制备产酸培养基，将步骤2）初筛的福建红曲醋专用醋酸菌菌株接种于盛有100mL产酸培养基的三角瓶中，第一次摇床培养，即得初筛菌株种子液；再取100mL产酸培养基至三角瓶中，接入1mL初筛菌株种子液，第二次摇床培养，即得初筛菌株菌液，然后测定初筛菌株菌液的产酸能力，具体方法为：吸取初筛菌株菌液200μL，加1.8mL无菌水稀释10倍，滴加1～2滴0.1%的酒精酚酞溶液，用0.1mol/L NaOH溶液滴定至微粉色，记录下消耗的0.1mol/L NaOH溶液的体积，初筛菌株产酸量为：X（g/L)=V_NaOH×C_NaOH×0.060×100/V其中，V_NaOH——测定用试样消耗NaOH标准液体积，mL；C_NaOH——NaOH标准溶液的浓度，mol/L；0.060——与1.0mL NaOH标准溶液[C(NaOH)=1.000mol/L]相当乙酸的质量，g；V——试样体积，mL；产酸量X——试样中总酸含量，以乙酸计，g/L；比较不同初筛菌株的产酸能力，能在高于4%乙醇的培养基中快速产酸的菌株即为福建红曲醋中专用醋酸菌菌株。